Способ получения 4-амино-6,7-дигидро-1-пентил-6-пропилпиразоло(3,4- @ )пирроло(3,4- @ )пиридин-5( @ )-она или его гидрохлорида Советский патент 1986 года по МПК C07D471/14 

3

которую поддерживают 2 ч. Полученный в результате раствор концентрируют, а остаточное масло растирают с эфиром, в результате чего получают 0,283 г искомого продукта в виде бёлого твердого вещества; Rf 0,5; силикагель; метанол: хлороформ 1:19.

е) 5-(N-npопил-2-оке0-3-пирролин-4-Ш1)амино-1-пентил-4-цианопиразол.

Смесь 0,144 г (1,13 ммоль) пирролидина, полученного по примеру 1д, 0,21 г (1,20ммоль) пиразольного продукта примера 1а и небольшой кристалл моногидрата ггара-толуолсульфокислоты в 5 мл толуола нагревают до кипения и поддерживают в этом состоянии 2 ч. Раствор охлаждают, затем обрабатывают последовательно насыщенным водным раствором карбоната натрия и солевым раствором, сушат над безводным сульфатом магния, В результате фильтрация через короткую пробку из 5 г силикагеля с использованием смеси 50% этилацетат-гексан, а затем смеси 5% метанол - метиленхлорид в качестве элюанта удаляют непрореагировавший пиразол. Остается продукт в виде белого твердого вещества; Rf 0,35; силикагель; метанол: хлороформ 1:19.

ж). 4-Амино-6,7-дигидpo-1-пeнтил-6-пpoпилпиpaзoлo-(3,4-в)-пиppoлo (3,4-е)пиридин-5(1Н)-он,

Раствор продукта примера 1е.в 3 мл хлористого метилена добавляют в 10 г (73,4 мколь) хлорида цинка, предварительно высушенного при 200 С под глубоким вакуумом в течение 3 ч. Смесь механически перемешивают и медленно нагревают до в потоке сухого азота, с тем чтобы удалить хлористьш метилен. Реакцию выдерживают в течение 1 ч при 180 С. Затем смесь охлаждают, добавляют воду и смесь хлористого метилена и тетрагидрофурана. Слои разделяют, а водную фа%у подщелачивают до рН 10 при помощи 20%-ного водного раствора NaOH. Добавляют лимонную кислоту, с тем чтобы растворить выпавший в осадок гидроксид цинка, затем раствор экстрагируют дважды хлористым метиленом. Соединенные органические слои промывают водным щелочным цитратом, затем солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворители удаляют, а полученный в результате твердый остаток после

5664

перекристаплизапии из смеси трет бутилметиловый эфир - гексан дает 60,4 мг продукта (общий выход 18% на стадиях е и ж) в виде тонких белых игл с т.пл. 145,5-146,5°С. Rf -0,3; силикагель; этилацетат: гексан 2:1. Мол. вес (масс-спектрометпически) 301. i

Вычислено, %: С 63,76; Н 7,69, N 23,24, CfeH,, N50

Найдено,%: С 63,77, Н 7,76, N 23,22.

Получен также гидрохлорид соединения I с т. пл. 209-218°С.

С целью доказательства депресснрующей активности предлагаемого содинения проведено испытание на крысах с использованием питья для подавления шокового состояния (см. табл. 1).

Самцов крыс весом 200-220 грамм перед испытанием лишают воды на 40 ч и пищи на 24 ч. В общем случа крысам стоматическим способом чере трубку вводят 5 мл/кг веса испытываемого соединения. Растворитель вводят контрольной группе крыс через трубку, вставленную в рот. Положительной контрольной группе крыс также стоматическим способом вводят контрольную дозу 18 мг/кг хлордиазепоксида. При дозировке используют случайньй подбор крыс. Крыс возвращают в клетку на один ча Спустя шестьдесят минут после введения прапарата крысу извлекают из клетки ц ее заднюю ногу натирают электродным гелем Сигна. При использовании внутрибрюшинного способа применения процедура идентична описанной выше за тем исключением, что препараты применяют (5 мл/кг) за 30 мин до испытания. Крысу помещают на пол камеры, вьшоженный трубкой для облизывания. Животному дается 5 мин, чтобы совершить 20 реакций облизьгоания и получить первый шоковьй импульс (0,5 мА). Если такая реакция отсутствует, то животное удаляют и исключают из испытания. Если совершено 20 реакций облизывания, то животному дается дополнительно 3 мин, в течение которых каждая двадцатая реакция облизывания совмещается с импульсом 0,5 мА. В течение этого периода испьпание автоматически начинается. автоматически осуществляется счет и автоматически завершается. Записывают число облизываний и импульсов. Активность испытьюаемого соединения оценивают при помощи сравнения среднего количества импульсов для группы, которой введена доза испытываемого соединения, со средними количествами импульсов как для группы, которой введен растворитель, так и для положительной контрольной групп с использованием t-критерия Стьюдента. В общем случае увеличение числа импульсов по сравнению с конт рольным указывает на успокаивающую или снотворную активность соединения . При испытании с использованием питья для подавления шокового состоя ния соединение I продемонстрировало свою активность, на что указывает значительное (,05 в соответствии с t-критерием Стьюдента) увеличением числа полученных импульсов. Второе испытание на депрессирующую активность осуществлено для соединения I с использованием теста на связывание (зн)флюнитразепама (см. табл. 2). Лизированную митохондриальнуюсинаптозомальную (Р,) фракцию получают из коры головного мозга самцов крыс Спрэга-Доули весом 150-250 г. Фракцию дважды Промывают при помощи центрифугирования в 50 мМ буфера трис -НС1, рН 7,4. Характерное связывание флюнитразепама измеряют при помощи аналитической фильтрации. Используют пробу в 2 мл, содержащую 0,2 UM (зн)флюнитразепама (84 КиУммоль),

Испытание с использованием питья для подавления шокового состояния

Соединение

Т а б л и ц а 1

Активная оральная доза, мг/кг 6 6 и мембраны, эквивалентные 10 мг свежего веса (0,2 мг протеина), в 50 ммоль трис -НС1 буфера рН 7,4. Препараты добавляютв 10 |ил 95%-ного этанола, который также добавляют в контрольные пробы. Нехарактерное связывание установлено в присутствии 2,5 |цМ клоназепама или 0,5fijM флюнитразепама. Пробы выдерживают в течение 90 мин при 0°С; в результате они достигают равновесного состояния перед фильтрацией и промывкой. Стандартные анализы выполняют трижды, причем каждый из них дает приблизительно 4000 отсчетов в минуту, 150 из которых относятся к нехарактерному связьтанию. Исследования по определению степени .сходства и максимального связывания выполнены . при помощи добавления различных количеств нерадиоактивного флюнитразепама кО,2(иМ(Н) флюнитразепама. Депрессирующая активность в испытании со связыванлем флюнитразепама проявляется в вытеснении флюнитразепама, как это происходит с бензодиазепинами, или в увеличении вероятности связьшания, как это происходит с картазолатом и траказолатом. В испытании со связыванием флюнитразенама соединение I проявило активность в качестве вытеснителя связей флюнитразепама. Соединение I не проявило какихлибо признаков токсичности. Кроме того, ЛД50 соединения I при стоматическрм применении к крысам превышает 800 мг/кг; при введении соединения стоматическим способом обезьянам в дозе 100 мг/кг оно также не привело к гибели животных.

1261566 Тест на связывание (Н) флюнитразепама

Таблица2

Соединение

Шг о

.8

(

Диазепам 0

Активная концентрация