Способ получения гепарина Советский патент 1988 года по МПК A61K31/727 

ы

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, в частности к способам получения фармацевтически препаратов.

Цель изобретения - поньшение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что гепаринсодержащее сырье с 90-95%-ным содержанием сухого вещества обрабатывают 1,5-12%-ным растворо поваренной соли при рН 8-12,8 при периодической или непрерывной проти- воточной экстракции при 20-80°С.

Способ осуществляют следующим образом.

Богатое гепарином, аморфное, зернистое, с устойчивой формой сырье с большой удельной поверхностью, содержащее 90-95% сухого вещества, в водной среде при температуре и величине рН, оптимальньк для данного способа переработки сырья, подвергают периодической или непрерывной противо- точной экстракции солевым раствором. Противоточную экстракцию проводят при 20-80 С, концентрации электролита (концентрации соли 1,5-12,0%) ,и при рН 8-12,8 или в 0,5-1,0 н.щелочном растворе.

В ходе всего процесса экстракции целесообразно поддерживать постоянство концентрации электролита, температуры и величины рН. Соотношение между экстругирующим солевым раствором и сырьем следует установить таким образом, чтобы образующаяся экстракционная вытяжка содержала 150- 300 1Е/МЛ гепарина. Для этого целесообразно поддерживать соотношение сухого вещества и жидкости примерно равным 1:5. Для установления величины рН применяют основания одновалентных или многовалентных металлов, целесообразно едкий натр или другие щелочи, обычно используемые для экстракции гепарина. В качестве электролита применяют любые соли, инертные , по отношению к гепарину, предпочтительно хлористый натрий.

В качестве сырья, богатого гепарином, берется сырье, которое содержит минимально на 5-35% (в расчете на сухое вещество) больше гепарина,

чем любое природное сырье.

Противоточную экстракцию проводят

в аппарате периодического действия вплоть до полного извлечения или же

непрерывным образом, целесообразно в и-образном экстракторе.

В качестве исходного материала с применяют богатый гепарином сухой концентрат, который является зернистым и аморфным и имеет высокую удельную поверхность.

Способ поясняется следующими при- O мерами.

Пример 1. Содержащее гепарин сырье аутолизируют и экстрагируют в присутствии толуола растворами электролита. 20 кг этого материала интен- -5 сивно перемешивают в реакторе с рубашкой вместе со 100 кг тонкоизмельченных свиных кишок, содержащих 18% сухого вещества и 150 л 10%-ного раствора сульфата аммония. После, сма-- 0 шения смесь нагревают до 38°С. Затем при перемешивании устанавли:р.ают рК смеси 8,8-9,2 прибавлением 40%-ного раствора едкого натра. Чтобы избежать вредных микробиологических процессов 5 к смеси прибавляют 3 л толуола.

После прибавления ферментов при З8 с в течение 36 ч проводят аутолиз, при этом смесь время от времени перемешивают. Контролируют рН среды 0 каждые 6 ч и по мере надобности

устанавливают на заданную величину . прибавлением 40%-ного раствора едкого натра.

После 36 ч аутолиза рН среды устанавливают равным 7,3-7,7 18%-ной соляной кислотой и смесь кипятят. После 10-минутного кипячения отделяют скоагулировавшиеся части на сит- чатом фильтре. Фильтрат при 60 С сепарируют, освободив его от жира. Получают 638 г темно-коричневого экстракционного бульона, концентрация в котором гепарина составляет 18,1 1Е/МЛ, что соответствует 11,54 М1Е гепарина. Выход составляет ,лишь 76%.

Пример 2. 5,О кг содержащего гепарин сухого концентрата разделяют на 10 равных частей. Эти порции, по 0,5 кг каждая, обрабатывают способом периодической пятиступенчатой проти- воточной экстракции. Отдельные стадии проводят следующим образом. Первую порцию высушенного концентрата 5 органа и подогретого до 40 С

0,25 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли, прибавляют к 3,2 л экстракционной смеси. Через 20 мин экстракт отфильтровыва5

0

5

0

ют под разрежением через воронку Бюхнера. Поверхность фильтра образуется металлической сеткой с диаметром отверстий 0,6 мм. Первый экстрак ционный раствор собираютр определяют его объем и замеряют его гепариновую активность.

Влажный остаток органа, оставшийс на проволочном сите, снова смешивают с подогретым до 40°С 0,25 н.раствором едкого натра, содержащим 6% поваренной соли, при этом снова устанавливают объем экстракционной смеси 3,2 л Вторую экстракцию уже однажды про- экстрагированной массы органа проводят таким же способом. Фильтрат, образующийся при второй экстракции первой порции концентрата органа, смешивают со второй порцией высу- шенного концентрата. Снова устанавливают объем экстракционной смеси , 3,2 л, ,

Последующие стадии соответственно проводят аналогично, В конечном ре- зультате проводят периодическую про- тивоточную экстракцию в 5 стадий. Экстракционный объем всегда составляет 3,2 л, температура 40 с.

Из 5 кг исходного материала, со- держащего 90,4% сухого вещества, пятиступенчатой периодической экстракцией получают 2,599 М1Е гепарина.

Пример 3. Содержащий гепарин сухой концентрат экстрагируют. 40 кг сырого материала хорошо перемешивают с 400 л воды. Устанавливают рН 2,7 соляной кислотой и смесь нагревают до 38 С. Прибавляют пепсин в количестве, соответствующем 10 кг слизистой оболочки свиного желудка, затем снова устанавливают рН 2,7с При постоянном перемешивании в течение 20 ч проводят протеолиз, поддерживают температуру 37-39°С. После 20-часового протеолиза устанавливают рН средь 8,0 40%-ным раствором едкого натра и к смеси прибавляю при 37 С 20 л активированной смеси поджелудочной железы. Второй протеолиз продолжается 10 ч. Каждые 2 ч контролируют величину рН и по мере необходимости снова устанавливают ее 8,0 при помощи раствора едкого нат

о 5 0

5

о

Q с

5

ра. Температуру поддерживают 37°С. После второго протеолиза смесь кипятят и затем фильтруют через ситчатьй фильтр. Получают 417 л фильтрата коричневого цвета, концентрация гепарина в котором составляет 32,0 1Е/мл, т.е. общее содержание гепарина равно 13,32 М1Е.

Пример 4. Богатый гепарином сухой концентрат экстрагируют непрерывным противоточным способом в и- -образном экстракторе.Высушенный исходный материал непрерывно подают в аппарат при помощи шнекового дозатора. Из распылительной головки, расположенной над дозатором, прибавляют двойной объем подогретого до 70 С 0,55 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли. Время пребывания материала в шнековом до- затосе составляет 10 мин.

Противотоком к набухшему материа- лу, находящемуся в отдельных и-образного экстрактора, подают 0,1 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли.

В ходе непрерывной противоточной экстракции поддерживают постоянную температуру 50°С, с целью улучшения массообмена включают вибратор, расположенный у днища и-образного экст- рактора.1 Объем непрерывно образующегося почти совершенно прозрачного экстракта светло-соломенно-желтого цвета замеряют при помощи ротаметра. Концентрацию гепарина определяют в пробах, отбираемых каждые 0,5 ч. Гепарин, содержащийся в экстракте, высаждают также непрерывно, образующийся осадок отделяют на фильтре барабанного типа.

Ч

Применяемая аппаратура имеет производительность 10 кг сухого концент- рата/ч, время пребывания составляет 35 мин. При 10-часовой работе получают 210 л экстракта, средняя активность которого по гепарину составляет 252 1Е/МЛ. Выход составляет 52,9 М1Е в расчете на 100 кг исходного материала, содержащего 90,4% сухого вещества.