Способ получения производных дигидропиридазинона Советский патент 1988 года по МПК C07D237/04 A61K31/50 A61P9/04 C07C279/28 

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных химических соединений, конкретно к способу получения новых производных дигидропиридаэинона, проявляющих инотропную, сосудорасширяющую и бронхорасширяющую активность и обладающих способностью ингибировать агрегацию тромбоцитов. Указанные свойства предполагают возможность применения этих соединений в медицине.

Целью изобретения является полу

безводном пиридине (25 мл) доб авля- ют диметилцианодитиоиминокарбонат (5,75 г) и смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь упаривают при пониженном давлении приблизительно до половины объема, разбавляют этанолом и оставляют с получением твердого вещества (3,85 г). После отстаивания и растирания фильтрат дает дополнительное количество твердого вещества (1,42 г). Твердое вещество комбинируют и растворяют в

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных дигйдропири- дазинона формулы I: BNHR, -y- l-кгг-хг /- -д jsCN где В -о- : -fVimG -jN н R,- водород или метил; Rj- водород или С,-С -алкил, которые могут найти применение в медицине. Цель - разработка способа получения новых соединений указанного класса, обладающих инотропной активностью. Получение соединений I ведут из соединения формулы BL, где R,- как указано; L - удаляемая группа, выбранная из группы, состоящей из С,-С -алкил- тиогруппы, С ,-С -алкоксигруппы или феноксигруппы и амина , где как указано. Новые прбизводные соединения I не проявляют признаков токсичности при дозировках, достигающих стократной предполагаемой терапевтической дозы, при оральном введении. 3 табл. а «о со с со со О5 со о: со

чение новых производных дигидропири- 5 кипящем пиридине (60 мл), содержащем дазинона, обладающих новым видом для немного воды. Раствор фильтруют и

ряда производных пиридазинона биологической активности инотропной.

Пример 1. (N -метил- N -цианогуанидино)-фенилj-5-метил- 4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон.

А. Раствор 6-(4-амикофенил)5-ме- ;тил-4,5-дигидро-3-(2Н)-пиридазинона

(2,0 г, 0,0098 моль) и дифенилциано- иминокарбоната (2,4 г,0,01 моль) в безводном диметилформамиде (15 мп) перемешивают при 115-120°С в течение 6 ч. Затем добавляют дополнительное

количество дифенилцианоиминокарбонанагревают при кипении с обратным хота (0,6 г, 0,0025 моль) и раствор на-30 лодильником в течение 2 ч. Затем ре- гревают в течение еще 2 ч.акционную смесь оставляют охлаждаться

Отгонка растворителя при пониженном давлении дает коричневый остаток, который промывают кипящим этанолом, а затем перекристаллизовывают из вод- ,с ного диметилформамида с получением (N -цианофеноксиформамидино)фе- нил -5-метил-4,5-дигидро 3(2Н)-пиридазинона, 1,5 г, т.пл. 164-165°С.

и фильтруют с получением целевого соединения (32 г), которое после перекристаллизации из водного диметилформамида дает целевое соединение, т.пл. 270-272 с, идентичное по данным тонкослойной хроматографии и ЯМР-спект- роскопии, продукту примера 1.

Пример 3. 6-t4-(NЗ-Этил-N2Соединепие t-ivjAer быть также перекрис- о цианогуанидино)фенил -5-метш1-4,5-дигидро-З (2Н)-пиридазинон.

(N -Цианофеноксиформамидино)- фенил -5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)-пи- дс ридазинон (2,0 г) и раствор этилами- на (33% в этаноле, 75 мл) перемещи- вают и нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Добавляют дополнительное количество этиламина (33% в этаноле, 75 мл) и перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение еще 3 ч. Смесь упаривают при пониженном давлении с получением коричневого масла. Его растирают под хлороформом с получением кремового твердого вещества (1,15 г), которое подвергают хроматографии в колонке на силикагеле (элюент-хлороформ) с получением цеталлизовано из ацетонитрила.

Б. Смесь указанного формамидина (1,5 г, 0,0043 моль) и раствора метиламина (33% в этаноле, 50 мп) пере- мещивают и нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 3,5 ч. Раствор упаривают до небольшого объема при пониженном давлении и остаток растворяют в горячем этаноле. После обработки древесным углем раствор обрабатьгеают водой и оставляют охлаждаться с получением целевого соединения (1,0 г), т.пл. 264- 265°С.

Пример 2. (К -Метил- . N -цианогуанидино)фенил -5-метил- 4,5-дигидро-З(2)-пиридазинон.

А. К 6-(4-аминофенл)-5-метил-4,5- дигидро-3(2Н)-пиридазинону (4 г) в

50

55

уменьщают в объеме с получением суспензии, которую разбавляют ацетоном и оставляют. Это дает кристаллы 6((М-циано-В-метилизотиоуреидо)-фе- нип-5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинона (4,02 г), т.пл. 231-232 С (разл.) .

Б. (Н-Циано-8-метипизотиоуреидо)фенил -5-метил-4,5-дигидро-З(2Н) пиридазинон (48 г) добавляют к раствору метиламина (33% в этаноле, 600 мп) при перемещивании и смесь

и фильтруют с получением целевого соединения (32 г), которое после перекристаллизации из водного диметилформамида дает целевое соединение, т.пл. 270-272 с, идентичное по данным тонкослойной хроматографии и ЯМР-спект- роскопии, продукту примера 1.

Пример 3. 6-t4-(NЗ-Этил-N2левого соединения (О,АО г), т.пл. 208-209 С.

Пример 4. 6-fA-(N - Изопро- пип-№-цианогуанидино)фенилJ-5-ме- тил-4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон,

Изопропиламин (7,4 мл) добавляют к (N -циано)феноксиформамидино) фенил -5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)- пиридазинону (1,5 г) в этаноле (100 мл) и смесь перемешивают 4 ч при кипении с обратным холодильником (дополнительное количество изопропил- амина 3 мл, добавляют по прошествии 2 ч). Смесь упаривают при пониженном давлении с получением бледно-зеленого твердого вещества. Растиранеие под этанолом дает кремовое твердое вещество (0,94 г), которое подвергают флаш-хроматографии в колонке на си- ликагеле (градиент от хлороформа до хлороформ: метанола 40:1) с получением целевого соединения в виде твердого вещества (0,65 г), т.пл. 255°С.

Пример 5. (М -Бутш1- N -цианогуанидино)фенил 3-5-метил-4,5- дигидро-3-(2Н)-пиридазинон.

Смесь н-бутиламина (0,7 г) и 6- 4-(К -цианофеноксиформамидино)фенил |5-метш1-4,5-дигидро-3(2Н)-пиридази- нона (2,0 г) в этаноле (100 мл) перемешивают 4 ч при кипении с обратным холодильником. Смесь упаривают при пониженном давлении с получением бледно-желтого масла, которое при растирании с диэтиловым эфиром дает не совсем белое твердое вещество. Его подвергают флаш-хроматографии в колонке на силикагеле (элюирование

градиентом от хлороформа до., хлороформ соединения (1,1 г),т.пл, метанола 40:1) с получением целевого

(разл.).

соединения в виде белого твердого вещества (0,75 г), т.пл. 184-186°С.

Пример 6. (№-Цианогуа- нидино)фенил J-5-мeтил-4,5-дигидро- 3(2Н)пиридазинон.

6-C4-(N -Цианофенйксиформамидино)- фенил -5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон (2,0 г) в этаноле (100 мл) перемешивают 3 ч при кипении с обратным холодильником в процессе про- булькиванйя газообразного аммиака через раствор. Реакционную смесь оставляют на ночь,а затем упаривают при пониженном давлении с получением липкого твердого вещества, которое обрабатывают кипящим этанолом, с получением белого твердого вещества (1,1 г). Перекристаллизация из мета0

нола дает целевое соединение (0,8 г), т.пл. 258-260 С (разл.).

Пример 7. (N -Метил- N -цианогуанидино)фенил -4,5-дигид- ро-3(2Н)-пиридазинон.

А. 6-(4-Аминофенил)-4,Ь-дигидро- 3(2Н)-пиридазинон (5,0 г) и дифенил- цианоиминокарбонат (0,9 г) перемешивают в безводном диметилформамиде (20 мл) в течение 4 ч при 120°С. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют и упаривают при пониженном давлении . с получением масла. Это масло экстра5 гируют в кипящий этанол (1л), который уменьшают по объему (до 3D мл) и фильтруют с получением ( цианофеноксиформамидино)фенил -4,5- дигидро-3(2Н)-пиридазинона (3,5 г),

Дальнейшая экстракция масла кипящим этанолом дает дополнительный продукт (2,2 г).

Б. Смесь указанного формамидина (3,2 г) и раствора метиламина (33%

5 в этаноле, 100 мл) перемешивают и нагревают 3 ч при кипении с обратньм холодильником. Смесь фильтруют в горячем состоянии и твердое вещество промывают этанолом и диэтиловым ффи0 ром. Примеси экстрагируют из этого твердого вещества в ходе перемешивания в кипящем этаноле. Затем твердое вещество растворяют в горячем диметилформамиде, обрабатьшают древесj. ным углем, фильтруют через диатомит и фильтрат упаривают.до небольшого объема (около 5 мл). Затем его растирают с горячим этанолом (100 мл) и фильтруют с получением целевого

о соединения (1,1 г),т.пл,

267°С

соединения (1,1 г),т.пл,

(разл.).

Пример 8. (К2-Циано)- этоксиформамидино)фенил -5-метил- 4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон.

6-(4-Аминофенил)-5-метил-4,5-дигидро-З (Н) -пиридазинон и диэтил- цианоиминокарбонат в диметилформамиде нагревают с получением целевого соединения. Это соединение вводят в реакцию с метиламином, получая соединение примера 1.

Новые производные дигидропирида- зинола подвергают биологическим испытаниям по следующим активностям.

Кардиостимулирующая активность.

Соединения и их фармацевтически допустимые соли испытывают с целью определения кардиостимулирующей активности.

Морских свинок (500-700 г) обоих полов убивают, быстро удаляют сердца и переносят в анатомическую кюветку, содержащую оксигенированную среду. При нахождении в ваннообразующей среде правый желудочек разрезают на две полосы. Каждую полосу подвешивают в ванне на 50 мл, содержащей раствор Кребса-Хензелайта при 37°С

и ванну пробулькивают 9-5% кислорода и 5% углекислого газа. Желудочковые полосы подвергают электрической стимуляции частотой 1,0 Гц при удвоенном пороговом напряжении. На полосах создают напряжение покоя величиной 1,0 г и напряжение поддерживают постоянным с помощью повторной регулироки на протяжении периода уравновешивания (60 мин). Ваннообразующую среду часто .меняют в течение этого периода. После достижения стационарной опорной линии в Ваннообразующую .среду добавляют испытываемое соединение и вычерчивают кривую ответной реакции для кумулятивной концентрации. Использованные согласно изобретению соединения, подвергнутые испытанию, дают 50% увеличение силы сокращения желудочковой полосы при концентрациях в ваннообразующей среде, которые меньше 10 молярной, что демонстрирует их активность в качестве

позитивных инотропных средств.

В приведенной методике испытаний соединения согласно примерам характеризуются следующими показателями (кардиостимулирующая активность in vitro).

Кардиостимулирующая активность in vivo (анестезированные кошки).

У анестезированных кошек, предва0

рительно обработанных ганглиоблокато- ром (мекамиламином или пемпидином) и пропранололом, соединения согласно примерам вызывают устойчивое увеличение показателя dp/dt для левого желудочка (который .является индексом сократимости левого желудочка) при внутривенном введении. Доза, необходимая дляповьшения показателя dp/dt j,c дпя левого желудочка на 50%, указана как ЕДу|, .

Амринон

0,2 0,2 0,2

0,31

0,7

1,6

5,6

Продолжительный эффект

Средний по продолжительности эффект

Продолжительный эффект Средний по продолжительностиэффект

Короткий эффект

0

5

0

5

Наблюдаются минимальные изменения кровяного давления или частоты сердечных сокращений.

Кардиостимулирующая активность in vivo (собаки в нормальном состоянии).

Соединение примера 1 повьш1ает показатель dp/dt.. для левого. желудочка у находящихся в нормальном состоянии собак после внутривенного введения при дозировке ниже 0,1 мг/кг. Введение перорально вызывает позитивную инотропную реакцию при дозировке 0,25 мг/кг и ниже. Указанная позитивная инотропная реакция сохраняется в течение 9-12 ч без изменения кровяного давления или частоты сердечных сокращений. Поэтому это соединение особенно выгодно по признаку сила - частота сердечных сокращений. В отличие от этого соединения амринон менее активен и продолжительность его действия короче.

Сосудорасширяющая активность. Соединение примера 1 вызывает зависимое от дозировки расширение сосудов задней части туловища анестези- рованньпс крыс (аутоперфузированных при постоянном кровяном давлении) в пределах дозировки 1-10 мкмоль/кг (внутривенно). Доза, необходимая для 50% увеличения кроветока в задней части туловища,составляет 4,6 мкмоль/к Наблюдается значительная продолжительность эффекта.

Соединения примеров 3,4,5 и 7 испытывают на задней части туловища аутоперфузированных анестезированных крыс (аутоперфузия при постоянстве кроветока). Дозы, необходимые для 15% снижения перфузионного давления в задней части туловища (расширение сосудов), приведены ниже.

Расширение бронхов in vivo.

Морских свинок - самцов расы Dun- kin-Hortley (530 г 1 6 г) анестезируют сагаталом (пентобарбитал-натрий, 90 мг/кг внутрибрюшинно). Измеряют сопротивление воздушных дыхательных путей с применением разновидности классического метода Концетта-Россле- ра.

Дпя внутривенного введения выбрана доза 2-пиридш1этиламина, которая дает приблизительно 100% увеличения сопротивления воздушных путей, Болюсные дозы соединения примера 1 вводяг- (внутривенно) за 1 мин до введения 2-пиридилэтиламИна. . .

Соединение примера 1 снижает индуцированный 2-пиридилэтиламином бронхоспазм. Пороговая доза для этого соединения 3,16-10 моль/кг. Доза соединения примера 1, которая снижает 2-пиридилэтиламиновый бронхоспазм на 50% (ЕД5о), составляет 3,9

«10 моль/кг,что демонстрирует анти- ,бронхоспазматическую активность.

510 г

15 20

25

30

35

40

45

50

55

Ингибирование агрегации тромбоцитов in vitro.

Плазму подготавливают следующим образом. Кровь от 6 нормальных здоровых добровольцев смешивают с 3,8 мас.% (об.) тринатрийцитрата (9 ч. крови: 1 ч. цитрата). Образцы центрифугируют при 150 g в течение 10 мин и отделяют надосадочную обогащенную тромбоцитами плазму (НОТП), Концентрацию тромбоцитов в НОТП доводят до 300±50х10 л тромбоцитов добавлением аутологической обедненной томбоцитами плазмы.

Аликвотные пробы по 25 мкл раствора 40 мкг/мл соединения примера 1 инкубируют с аликвотными пробами по 225 мкл НОТП в приборе Пейтон Аг- регометер в течение 3 мин. Изучают также контрольные растворы, один из которых аналогичен испытуемому раствору по рН раствора и его тоничности, а другой является раствором 0,9 мае,% (об) NaCl. По прошествии 3 мин к каждому раствору добавляют аликвотные пробы по 25 лкп раствора аденозин- дифосфата при концентрации 20 мкмоль. Записывают данные реакции агрегирования до ее завершения с максимум 3 мин. Процедуру повторяют, используя разные агрегирующие средства: 100 мкг коллагена; 100 мкмоль адреналина или 5 мл/мл арахидоновой кислоты вместо аденозин-дифосфата.

Реакции агрегирования, индуцированные различньп и агрегирующими средствами, измеряют для тромбоцитов от каждого донора. Результаты оценивают визуальным наблюдением индикации агрегирования, вьщаваемой агрег -гометром Пейтон, и полуколичественно определяют измерением свето- пропускания спустя 3 мин после добавления индун 1рующего средства.

Соединение примера 1 при конечной концентрации 5 мкг/мл ингиби- рует агрегацию тромбоцитов, индуцированную растворами аденозиндифосфа- та, арахидоновой кислоты, коллагена или адреналина. Последовательные разбавления этого соединения должны быть приготовлены и испытаны на ин- гибирование агрегации, индуцированной аденозин-дифосфатом. Вторая волна агрегации полностью ингибировалась соединением примера 1 при 0,5 мкг/мл и более.

9

Производные дигидропиридазинона проявляют новый вид биологической активности для данного ряда соединений, так как ближайшие соединения аналогичной структуры диалкилгуани- динофенилпиридазиноны не проявляют инотропной активности.

Новые производные дигидропиридазнона не проявляют признаков токсич- ности при дози1 овках, достигающих стократной предполагаемой терапевтической дозы, при оральном введении собакам в нормальном состоянии. Формула изобретени

Способ получения производных ди- гддропиридазинона общей формулы . НОГ

II

HH-C-NHRj

3

10 где R, - водород или метил-,

R{ - водород или С -С -алкил, отличающийся тем, что соединение общей формулы

NH-C

.15 CN

где R, имеет указанные значения L - удаляемая группа, выбранная из группы, состоящей из С,-С алкилтиогруппы, Сj-C -алкокси- группы или феноксигруппы, подвергают взаимодействию с амином общей NHjR,, где R, имеет указанные значения.