Способ выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS Советский патент 1989 года по МПК C12N9/14 

30 л/ч) при соотношении белок:сорбент не более 700 ед. Agjp : 1 см3 био- карба. По завершении сорбции колонку промывают 25,5 л (15-кратный объем) - 0,05 М трис-HCl буфера, рН 8,5. За- . тем элюируют фермент 8,5 л (5-кратный объем) 0,10 М трис-HCt буфера рН 8,5, содержащего 0,40 И хлористого натрия. Полученный элюат высушивают при дробном режиме. При этом выход фермента составляет 65-70%, активность не менее 30000 ед.акт./мг белка. Из 100 л культуральной жидкости удается выделить более 100 г препарата, содержащего более.10% белка.

Пример 2. Биокарб Д-241 уравновешивают 0,10 М натрий-ацетат- ным буфером, рН 5,0 и помещают в колонку как в примере 1. Культураль- ную жидкость подкисляют концентрированной уксусной кислотой до рН 5,0 и помещают на колонку как в примере 1. Сорбция эндонуклеазы составляет 90-95%. Промывку колонки и элюцию фермента проводят как в примере 1. При этом выход фермента составляет 60-65%, активность около 25000 ед.акт./ /мг белка.

П р и м е р 3, Биокарб Д-24 уравновешивают 0,10 М натрий-ацетатным буфером, рН 5,5 и помещают в колонку как в примере 1. Культуральную жидкость подкисляют концентрированной уксусной кислотой до рН 5,5 и помещают на колонку как в примере 1. Сорбция эндонуклеазы составляет 40-87%. Промывку колонки и элюцию фермента проводят как в примере 1. При этом выход фермента составляет 35-65%, активность около 30000 ед„акт./мг

t белка.

Пример 4. Биокарб Д-24 уравновешивают и помещают в колонку как в примере 1. Культуральную жидкость наносят на колонку как в примере 1.

Промывку колонки проводят как в примере 1. Фермент элюируют 0,1 М трис-HCl буфером, рН 8,0, содержащим 0,35 М хлористого натрия. При этом выход фермента составляет 60-65%, активность.более 30000 ед.акт./мг белка.

Пример 5. Биокарб Д-24

уравновешивают и помещают а колонку как в примере 1. Культуральную жидкость наносят на колонку как в примере 1. Промывку колонки проводят как в примере 1. Фермент элюируют 0,1 М

трис-HCl буфером рН 8,5, содержащим 0,35 М хлористого натрия. При этом выход фермента составляет 65-70%. активность более 30000 ед.акт./мг белка,

При осуществлении способа в условиях, отличающихся от описанных, выход целевого продукта снижается.

Реализация способа обеспечивает упрощение и ускорение процесса.

Формула изобретения

1 ,. Способ выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости Serratia marcescens, включающий очистку методом ионообменной хроматографии, о т- ли чающийся тем, что, с целью упрощения и сокращения длительности процесса, ионообменнрй хроматографии подвергают непосред- ственно Культуральную жидкость, а ионообменную хроматографию проводят на катионообменнике Биокарб Д-24 с сорбцией целевого продукта при рН 5,0-5,5 и десорбцией в буфере при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35- 0,40 М хлористого натрия.

2. Способ по п. отличающийся тем, что для десорбции в качестве буфера используют 0, 1 1-1

5

трис-HCl.

Эндонуклеаза, выделяемая из культуральной жидкости SERRATIA MARCESCENS, гидролизующая нуклеиновые кислоты до ди-, три-, тетра-, и олигонуклеотидов, применяется для лечения и профилактики вирусного паралича пчел, для изучения структуры хроматина, может служить моделью для исследования влияния одновременного наличия сульфгидрильных и дисульфидных групп на конформационные переходы молекул. Цель изобретения - упрощение и ускорение процесса. Способ выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости S.MARCESCENS включает катионообменную хроматографию на бикарбе с сорбцией фермента при рН 5,0-5,5 и десорбцией при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35-0,40 М хлористого натрия. Способ позволяет за 40-45 ч из 100 л культуральной жидкости выделить 70-110 г препарата, содержащего 7-14 г белка без уменьшения степени чистоты препарата с сокращением времени выделения фермента в 8-10 раз и упрощением процесса по сравнению с известным. 1 з.п. ф-лы.