Способ получения ферритина Советский патент 1990 года по МПК C12P13/00 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине и биотехнологии при получении ферритина для количественного имму- нохимического анализа.

Цель изобретения - сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении, а также повышение выхода целевого цродукта.

Для этого получают экстракт печени или селезенки человека, фракционируют сульфатом аммония и очистку проводят сначала ультрацентрифугированием, а затем гель-::роматографией на TSK-геле HW-65, Сефакриле S-300 или кальций-тартратном геле.

Пример 1. Быстрозамороженную ткань печени или селезенки человека измельчают и гомогенизируют в тече ние 5 мин в охлажденном 0,05 М трис- НС1 буфере, pji -7,4. Неразрушенную ткань удаляют центрифугированием при 14000 g Б .течение 20 мин.

Супернатант фракционируют сульфатом аммония до концентрации 30%. 06- разз ющийся осадок удаляют центрифугированием.

В Супернатант добавляют новую пор- цию сульфата аммония до конечной концентрации 60% и перемешивают 30 - 60 мин. Центрифугируют, супернатант отбрасывают, осадок растворяют в минимальном объеме буфера, повторно

сл

00 ОС

СП

ОС

31538758

центрифугируют при 14000 g .в течение 20. мин,

Осветленный супернатант собирают и центрифугируют при 200000 g в течение 60 №ш. Полученный осадок растворяют в буйтере и повторно центрИ(1)у- гируют. Осадок растворяют в минимальном объеме 0,05 М трис-НС1 буфере, рН 7,4, содержащем 0,5 М NaCl,

центрифугируют при 37000 g в течение 20 мин.

Полученный препарат частями хро- матографируют на колонке 2,5 х 90 см с TSK-гелем HW-65, уравновешенной 0,01 М трис-НС1 буфером, рН 7,4, содержащем 0,5 М NaCl. Элюирование проводят этим же буфером, собирая фракции объемом 5-6 МП. Окрашенные фракции объединяют.

Выход белка составляет 10-12 мг из 100 г ткани печени и 15-19 мг из 100 г ткани селезенки.

Чистоту полученного препарата фер- ритина контролируют электрофорети- чески. Анализ выявляет единственную зону ферритина при отсутствии апофер- ритина и иримесных белков с меньшими молекулярными массами,

П р-им е р 2, Все стадии способа выполняют как описано в примере 1 за исключением того, что на стадии гель-хроматографии используют Сефак- рял S-300i

П р и М е р 3. Все стадии способа выполняют как описано в примере 1 за исключением того, что стадию хроматографической очистки проводят на кальций-тертратном геле (КТГ).Д1я этого на хроматографическую колонку размером 1,5 х 3,0 см, заполненную 5-6 см- КТГ и уравновешенную 0,05 М трис-НС буфером, рН 7,4, содержащем 0,5 М NaCl, наносят 40 мг белкового материала в том же буфере. Элюируют этим же буфером (скорость элюирова- ния 40-50 мл/ч) до прекращения поглощения при длине волны 280 нм.

Выход белка составляет 70-80% от ферритина, содержащегося в исходном белковом препарате.

20 Формула изобретения

1.Способ получения ферритина, включающий получение тканевого экстракта, фракциэнирование сульфатом аммония, ультрацентрифугирование и гельхроматогравию, отличающ и и с. я тем, что, с целью сохранения нативной структуры и иммунохи- мических свойств, фракционированию подвергают непосредственно тканевый экстракт,

2.Способ ПОП.1, отлича ю- щ и и с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта,проводят хроматографию на кальций - тартратном геле.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для иммунохимического микроанализа ферритина в медицине, в клинической биохимии и биотехнологии. Цель изобретения - сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении и повышение выхода целевого продукта. Для этого получают тканевый экстракт печени или селезенки человека, фракционируют экстракт сульфатом аммония, подвергают ультрацентрифугированию и хроматографируют. Для получения ферритина в препаративных количествах при хроматографии используют кальций-тартратный гель. 1 з.п.ф-лы.