Изобретение относится к новым биологически активным соединениям (БАС) из ряда производных триазиноиндолов, конкретно к 3-(морфолинокарбонилметилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индолу формулы I
повышающему устойчивость к гиперкапнической гипоксии.
Цель изобретения новое производное 1,2,4-триазино[5,6-b]индола, обладающее более высокой активностью и меньшей токсичностью, чем известный структурный аналог подобного действия 3-(2-аминоэтилтио)-1,2,4- триазино[5,6-b] индол (соединение II).
Следующие примеры иллюстрируют способ получения нового соединения и его биологическую активность.
П р и м е р 1. К раствору 16,18 г (0,08 моль) 3-меркапто-1,2,4-триазино[5,6-b]индола в 88 мл 1н. раствора NaOH прибавляют при интенсивном перемешивании раствор 14,39 г (0,088 моль) морфолинокарбонилметилхлорида в 15 мл воды. После прибавления 1/3 раствора наблюдают выпадение желтого осадка продукта реакции. Реакционную смесь перемешивают в течение двух часов, на следующий день осадок отфильтровывают, промывают охлажденной водой (2х30 мл) и ацетоном (25 мл), после чего сушат при 70oC. Получают 24 г (91%) 3-(морфолинокарбонилметилтио)- 1,2,4-триазино[5,6-b] индола. Вещество очищают перекристаллизацией из смеси ДМФА изобутанол (1:1,62 мл/г, выход при перекристаллизации 83%), т.пл. 247oC (обугл.). Вещество однородно по данным ТСХ на силуфоле UV-254; Rf 0,59, элюент ацетон-бензол ( 3:2).
Строение вещества подтверждается данными элементного анализа УФ-, ИК- и масс-спектров.
Найдено, C 54,52; H 4,51; N 21,21; S 9,90.
C15H15ON5S.
Вычислено, С 54,70; H 4,59; N 21,26; S 9,74.
УФ-спектр в этаноле, λмакс, нм (lg ε): 220 (4,32); 265 (4,48); 344 (4,04).
ИК-спектр, n, см-1): 1650 (C=0), 580, 750 (C-S).
Масс-спектр, Z/l (I,): 329; M+ (0,28); 243 (20); 242 (10); 215 (4,9); 203 (4,9); 202 (9,4); 174 (4,8); 169 (5,2); 146 (3,6); 114 (8,4); 87 (5,8); 86 (6,1); 72 (29); 58 (11); 57 (23); 56 (17); 45 (7,2); 44 (100); 43 (23); 42 (22).
П р и м е р 2. Влияние соединения I на выживаемость животных при острой гиперкапнической гипоксии.
Опыты проведены на белых мышах с массой тела 20 25 г. Соединение I вводили в брюшную полость в дозе 50 мг/кг в виде водной эмульсии, стабилизированной твином-80.
Контрольным животным вводили физиологический раствор в том же объеме. Через 60 мин животных помещали в герметически закрытые эксикаторы емкостью 8 л по 20 мышей в каждый.
Эффективность оценивали по ТЛ50 периоду продолжительности жизни 50% животных, по выживаемости животных. Количество животных в группах 10 штук. Результаты представлены в табл. 1 в сравнении с эффективностью соединения - аналога (II).
Как следует из представленных в табл. 1 данных, описываемое соединение обладает способностью увеличивать в 3 раза ТЛ50 и на 40% выживаемость животных по сравнению с контролем, т.е. оно обладает противогипоксическими свойствами, более выраженными, чем соединение II, наиболее эффективное соединение, обладающее данным видом активности.
П р и м е р 3. Выбор оптимальных доз соединения I.
Описываемое соединение I вводили в дозах 12,5; 25 и 50 мг/кг предварительно за 60 мин до помещения животных в гермокамеру. Эффективность оценивали по выживаемости в условиях гиперкапнической гипоксии. Результаты представлены в табл. 2 в сравнении с эффектом вещества-аналога.
Таким образом, новое соединение в дозах 25 и 50 мг/кг оказывается равно эффективным, увеличивая выживаемость до 90%
П р и м е р 4. Выбор оптимального времени введения соединения I при гиперкапнической гипоксии.
Описываемое соединение вводили аналогично примеру 3, в дозах 25 или 50 мг/кг. Животных помещали в гермокамеру непосредственно сразу после введения БАС (1 серия опытов), через 30 мин (2 серия) или через 1 ч после введения БАС (3 серия). Эффективность БАС оценивали по выживаемости животных в сравнении с контролем и веществом-аналогом (II). Результаты опытов приведены в табл. 3.
Таким образом, описываемое соединение более эффективно, обеспечивает выживаемость в 100% случаев при предварительном однократном введении в диапазоне доз 25 50 мг/кг в интервале до 30 мин до воздействия гиперкапнической гипоксии (помещения в гермокамеру). Предварительное введение соединения I с проявлением наибольшей биологической активности в период 0 30 мин перед началом ее проявления является наиболее предпочтительным в определенных ситуациях. т.е. эффективная доза соединения I в два раза меньше, чем доза соединения II, которое в аналогичных условиях менее эффективно.
П р и м е р 5. Определение токсичности и широты терапевтического индекса (ТИ) соединения I.
Исследование токсичности нового соединения проводили в опытах на белых мышах с массой тела 20 25 г, белых крысах с массой тела 250 280 г.
Вещество вводили в желудок или брюшную полость в виде водной эмульсии, стабилизированной твином-80. Наблюдение за животными осуществляли в течение 10 дней после введения БАС в диапазоне доз от 2 до 20 г/кг, поскольку дозы вещества, обеспечивающие выживаемость животных в 100% случаев (25 50 мг/кг), оказались нетоксичными. При введении соединения I в желудок гибели животных не наблюдали, при введении в брюшную полость имела место гибель отдельных животных, что не позволяет определить ЛД50. Таким образом, описываемое соединение является практически нетоксичным соединением, в отличие от вещества-аналога II, ЛД50 которого при введении в желудок составляет 12,5 г/кг, при введении в брюшную полость близка к 4 г/кг. Широту терапевтического действия (терапевтический индекс (ТИ) определяли соотношением величины ЛД50 и ЕД50 (эффективной дозы). Исходя из полученных данных, ТИ соединения I превышает 800, в то время как эта величина для вещества- аналога составляет 250. Результаты приведены в табл. 4.
Таким образом, описываемое биологически активное соединение (БАС) при однократном предварительном введении непосредственно перед или за 30 мин до воздействия в дозе 25 50 мг/кг обеспечивает выживаемость в 100% случаев при 100%-ной гибели в контроле. Новое соединение повышает устойчивость к гиперкапнической гипоксии более эффективно, чем вещество-аналог II, при однократном введении и на том же уровне, что при повторном введении (100% выживаемость).
Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности 3-(морфолинокарбонилметилтио)-1,2,4- триазино[5,6-b]индола, повышающего устойчивость к гиперкапнической гипоксии, и может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и менее токсичных соединений указанного класса. Синтез ведут взаимодействием 3-меркапто-1,2,4-триазино[5,6-b]индола с морфолинокарбонилметилхлоридом в присутствии NaOH в среде воды. Выход 91%, т. пл. 247oC (обугл.), брутто-формула C15H15ON5S. Новое соединение при токсичности ЛД50 >20 г/кг (при введении в желудок) при однократном предварительном введении непосредственно перед или за 30 мин до воздействия в дозе 25 - 50 мг/кг обеспечивает 100%-ную выживаемость против ЛД50 12,5 г/кг, 60 - 70%-ной выживаемости для известного соединения при тех же условиях. 4 табл.
3-(Морфолинокарбонилметилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индол формулы
повышающий устойчивость к гиперкапнической гипоксии.
