Способ получения вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей и Марбург Советский патент 1993 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения РНК - содержащих почкующихся вирусов,

В изобретении это достигается за счет использования в качестве биологического стабилизатора 1-хлорметилсилатранаили 1- этоксисилатрана.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. Готовят питательную среду для культивирования вирусов ВЭЛ и Марбург на основе стандартной среды Игла MEM с 10% сывороткой крупного рогатого скота (СКРС).

В среду добавляют 1-хлорметилсилатран (ХМС) в концентрации - мас.%. Далее в полученную среду вносят клетки Vero в концентрации 2105 кл/мл, которые подращивают до состояния монослоя в течение 2 сут при 37°С. Затем монослой заражают, суспензией вирусов ВЭЛ и Марбург из расчета 1±10 БОЕ/клетку. После адсорбции вируса в течение 40 мин при комнатной температуре монослой заливают поддерживающей средой Игла MEM с 2% СКРС.

После инкубации при 37°С в течение 2 сут вирус (ВЭЛ) и в течение 7 сут (вирус Марбург) образцы полученной вирусной суспензии испытывают на термочувствительность методом ускоренного хранения. Суть теста ускоренного хранения заключается в выдерживании (экспозиции) вирусо- содержащих суспензий при 37 и 20°С, где во времени определяются биоактивности испытуемых образцов.

При повышенных температурах ускоряются процессы термоинактивации микроорганизмов, что позволяет в относительно сжатые временные сроки определить уровень деградации биологического материала.

При испытании по предложенному способу вирусосодержащие суспензии (ВЭЛ,

ел

с

00

0

СА)

ю ел

Марбург) разливают в пенфлаконы (по 1 мл) и хранят до 9 сут (37°С) и до 30 сут (20°С).

Периодически во времени извлекают испытуемые образцы и определяют их биоактивность стандартным методом десятикратного разведения и титрования на монослое эмбриональных фибробластов кур (для вируса ВЭЛ) и на монослое клеток Vero (для вируса Марбург).

Биотитры вирусных суспензий выражают в БОЕ/мл.

Аналогично в этих же условиях испытывают контрольный образец - суспензию вируса, наработанную по стандартной методике. Результаты исследований представлены в табл. 1.

П р и м е р 2. Культивирование вирусов ВЭЛ и Марбург, а также определение их термоустойчивости проводят как описано в примере 1. В составе питательной среды используют 1-этоксисилатран (ЭТС). Результаты исследований приведены в табл. 2.

Результаты, приведенные в табл. 1 и 2, свидетельствуют о том, что при использова0

5

0

5

нии 1-этоксисилатрана и 1-хлорметилсилат- рана в концентрации - мас.% в составе питательной среды термоустойчивость вирусов ВЭЛ и Марбург существенно повышается.

Это имеет большое значение для сохранения биологической активности вирусов на этапах создания и хранения вирусных препаратов.

Формула изобретения Способ получения вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей и Марбург, предусматривающий выращивание перевиваемых клеточных культур до состояния монослоя в стандартной питательной среде в присутствии биологического стабилизатора, добавление к монослою вируссодержа- щего материала с последующей инкубацией и выделением вирусов, отличающий- с я тем, что, с целью повышения термоустойчивости вирусов, в качестве биологического стабилизатора используют 1-хлор-метилси- латран или 1-этоксисилатран в концентрации 1 - 1 мае.%.

Использование: биотехнология, вирусология, производство вирусных препаратов. Сущность изобретения: повышение термоустойчивости вирусов венесуэльского энцё- фаломиелита лошадей и Марбург, при культивировании в стандартной питательной среде в присутствии биологического стабилизатора. В качестве стабилизатора используют 1-хлорметилсилатран или 1- этоксисилатран в концентрации 110 .%. 2 табл.

Биологическая активность вирусов ВЭЛ и Марбург после культивирования в питательной среде, содержащей I-хлорметилсилатран и после термоинактивации

Та6лица2

Биологическая активность вирусов ВЭЛ и Марбург после культивирования в питательной среде, содержащей 1-этоксисилатран, и после термоинтактивации

Таблица 1