Способ получения адсорбентов с гидразидными группами на основе полисахаридных носителей Советский патент 1985 года по МПК C08B37/12 

Изобретение- относится к химии полиме ов, конкретнее к усовершен ствованному способу получения адсорбентов с гидразидными группами на основе полисахаридных носителей, которые находят применение при получении биоспецифических адсорбентов для очистки биополимеров методом аффинной хроматографии и могут использоваться для иммобилизации различных лигантов непосредственно или после соответствующих модификаций.

Целью изобретения является упрощение процесса и повышение устойчивости носителей.

Пример 1. Получение адсорбента гидразидосефароза 4В.

, Метоксикарбонилирование сефарозы 4 в .

.10 мл препарата сефароза 4В промы вают на стеклянном фильтре смесью

ацетон:вода (25:75, 50:50, 75:257 по 50 мэт) и затем 100 мп сухого ацетона. Гель суспендируют в 10 мл сухого толуола и 2 мп сухого пиридина и при 4°С и перемепшвании добавляют за 2 мин раствор 1 мл (10 ммоль метоксикарбонилхлорида в 2 мл сухого ацетона. Смесь перемешивают 30 мин при 4°С, гель отделяют, промывают 50 мл сухого ацетона и 50 мл изопропилового спирта. Для анализа пробу высушивают над Pj 0. В ИК-спектре полученного образца метоксикарбонапсефарозы 4В обнаружена полоса 1750 см , характерная для группы OCOCHj.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы 4В.

К суспензии 10 мл метоксикарбонилсефарозы 4В в 5 мп изопропилового спирта добавляют 20 мп гидразингидрата и перемешивают при в течение 16 ч. Затем гель переносят на фильтр и промывают 50 мл изопропилового спирта, 100 МП О,1 М НСВ и затем водой до отсутствия гидразинг идрата в промьганьк водах (тест с тринитробензолсульфокислотой) . По яученный адсорбент - гидразидосефароза 4В - при обработке тринитробензолсульфокислотой в боратном буферном растворе (рН 9) дает красное окрашивание, характерное для гидразидных групп. Количество гидразидных групп на адсорбенте здесь и далее определяют по элементному анализу

на азот. Оно равно 150га5 ° ь на 1 г сухого веса.

И р и м е р 2. Получение адсорбента гидразидо-СЬ-сефароза.

Метоксикарбонилирование сефарозы CL.

Метоксикарбонилирование 10 мп QLсефарозы проводят, как в примере 1, используя в качестве растворителя хлороформ, не содержащий спирта. Полученный продукт промывают 50 мп сухого ацетона и 50 мп изопропилового спирта. ИК-спектр, см: 1750

(ососнр.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL.

К суспензии 10 мл метоксикарбонилсефарозы CL в 5 мл изопропилового спирта добавляют 20 мп гидразингидрата и нагревают 3 ч при . Затем гель промывают, как в примере 1. Адсорбент гидразидо-СЬ-сефароза содержит 80 рмоль гидразидных групп на 1 г сухого веса.

П р и м е р 3. Получение адсорбента гидразидносефадекс G-75.

Метоксикарбонилирование и гидразинолиз 10 мл сефадекса G-75 проводят по методике, описанной в примере 2. Полученный адсорбент содержит 38р моль гидразидных групп на 1 г сухого веса и окрашивается в красный цвет при обработке тринитробензолсульфокислотой.

П р и м е р 4. Получение адсорбента гидразидоцеллюлоза.

Метоксикарбонилирование целлюлозы

20 МП коммерческого препарата мелкокристаллической целлюлозы обезвоживают промыванием смесями ацетонвода (25:75, 50:50, 75:25, по 100 мп и затем 100 мп сухого ацетона. Затем носитель суспендируют в 15 мл сухого толуола, содержащего 10 мл сухого пиридина, смесь охлаждают до и при перемешивании за 2 мин добавляют раствор 4 мл ( /г|моль) метоксикарбонилхлорида в 5 МП сухого ацетона. Суспензию перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин при . Гель отделяют и промывают 50 мл изопропилового спирта.

Гидразинолиз метоксикарбонилцеллюлозы.

Гидразинолиз метоксикарбонилированной целлюлозы проводят, как в примере 1. Полученный продукт дает крас3,

ное окрашивание при качественном тесте с тринитробензолсульфокиспотой Содержание гидразидных групп на полученном адсорбенте определяют по следующей методике. К 200 мг адсорбента (сухой вес) добавляют 1 мл насыщенного раствора тетрабората натрия и 1 мл 1%-ного раствора тринитробензолсульфокислоты, суспензию перемешивают 30 мин при . Затем ярко-красный гель отделяют, промывают 0,2 М раствором хлористого натрия (общий объем фильтрата и промывных вод 25 мл). К аликвоте фильтрата (0,1 мл) добавляют 0,9 мл насыщенного раствора тетрабората натрия и 1 мл 0,2 М раствора дигидразида адипиновой кислоты. Через 15-20 мин определяют поглощение полученного раствора при 500 нм, считая коэффициент молярной экстинкции Е 16500. По разности между первоначальным и отмытым с адсорбента количеством тринитробензолсульфокислоты п-э- 714634

считывают содержание гидразидных групп на адсорбенте. Гидразидоцеллюлоза содержит 25 мкмоль гидразидных групп на 1 г сухого веса. 5 Пример5. Получение адсорбента гидразидосефароза CL-4B.

Метоксикарбоншшрование сефарозы CL-4B.

с

10 Метоксикарбонилирование сефарозц CL-4B проводят, как в примере 1, используя 4 мл (40 моль) МКХ в 6 МП сухого ацетона. Полученный продукт промьшают 50 мл сухого ацеf5 тона и 50 МП изопропанола.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL-4B.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL-4B проводят, как в примере 1, 20 используя 10 мл гидразингидрата

на 10 мл адсорбента. Полученный адсорбент содержит 190 мкмоль гидразидных групп на 1 г сухого веса адсорбента.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДСОРБЕНТОВ С ГВДРАЗИДНЫМИ ГРУППАМИ НА ОСНОВЕ ПОЛИСАХАРИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ, включающий активацию полисахаридного носителя и обработку гидразинсодержащим реагентом, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повьшения устойчивости адсорбентов, активацию проводят обработкой метоксикарбонилхлоридом при объемном соотношении метоксикарбонилхлорида и носителя