Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ -карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли Советский патент 1986 года по МПК C07D303/16 A61K31/336 A61P35/00 C07D407/12 

) ;о гемие относится к способу

Г):ту-;:-.;;1;Я НОЙЬК ХКМИЧвСКИХ бИОЛОГИ

есяи актканьтх соединений, коикрет- 1И5 к сттособз г олучемия новьсс производ- i.)x АИ ;чгидродульцита-1,2-5,6-диан- пцг.р --- ; й-бис--()-карбоксипропионил)-- ульцита или его динатриевой соли, обладалоиз х способностьюингибировать азвитие злокачественных опухолей.

Цель т-53обретения - получение но- вьк произво/tiibnc ряда 1 ,2-5, гн/ родуль 1,ита,, обладающих более высоим терапевтическим индексом при бо ае г-пякой токсичности.

П р и мер 1, 1,46 г (10 ммоль) 1 ,2--5 ,, б--дианпидроду,т1ьцита растворяют , в 20 кл сухого этилацетата, добавляют к раствору 5 мл пиридина, а затем к смеси малыми порциями добавляют 2,0 г (20 ммоль) янтарного ангидрида при ггостояшюм перемешивании. Смесь подот ревают до 45°С и перемешивают npj этой температуре в течение еще В ч с Растворитель дистиллируют в вакууме; остаток отбирают в смеси этил- ацетата и водьц полученную смесь ос:торожно подкисляют, охлаж.о;о,я льдом, ДО рН 4-5. Орган1-гческую фазу отделяют промывают водой, высушивают к вы- карит ашт Получают 2s5 г ocTa i Kb,, которой соответствует коли- Ч.ственг1ому вькодУэ рассчитанному для моьЕосукцинил-диангидродульцита.

Полученное сырое seutecTBO подвергают хг)оматографированию на в:олонке с сил п:агелем5 используя смесь (I lj объем/объем) метанола и этилацетата в г .ачестве элюирующего агента. Фрак- IVHK,, содержащие чистые продукты, пе- ремЕпппзают э раствор BbinapnBaifJT в вакууме. Полученный твердый продукт . рт ают перекристаллизации из с чес,; ;1.р;этилового Эфира и петролей- ного зфира; а затем из смеси метано- . ла дизтк-пового эфира. Получают 1 , 8 г J 2-5 S б-диангидро-З , 4-б-ис- -(р-карбоксипропионил)дульцита.

Вычислено, %: С 48,78; Н 5,73; О Д5,49.

С„„Н,,0,„ (346,29) Н.айдено„ %; С 48,35; Н 5,25; О 46,60,

Эквивалентная ма сса: вьгаислено 173 S найдено 180,

ИК-спектр; 3350 (карбоксиль- ;ая группа), 1235 оГ (эпокси) ,, бен- лшгт- яые и гидроксильнь1е полосы не обпаруяепы.

Растворимость: сосдитте-ше хороиго растворяется в спирте и тетрагидро- фуране и слабо растворимо в диэтило- вом эфире и воде,

Пример 2. Получение динат- рий-1 ;, 2-5 5 6--диангидро-3 ,4-бис-(1. -карбоксипропионил)-дульцита- 2П 0..

246,29 г (1 моль) и2-5, гидро-3,(р-карбоксипропионил)- --дульцита растворяют в 3360,3 мл

5%-ного (по весу) бикарбоната натрия с постоянным перемешиванием при комнатной температзпэе до тех порэ пока не прекратится образование двуокиси углерода. По.лученный раствор отфильтровывают и лиоф шизушт. Получают 426.,29 г (1 моль/100%) динатрий-1, 2- 5 , б-днангидро-3 j 4-бис-(р -карбокси- пропионил)дулыдит . В стабильном негигроскопичном (при комнатной температуре) веществе установили число колец, которое составляет 99%.

ИК-спек т р; 1725 (сложный эфирньрл карбонил) J 1680 см (кислот- карбонил) . Характерная для кислотных ГДДРОКСИЛ.ОВ полоса в 3500- -2800 см отсутствует.

Вычислено, %: С 39,447; К 3,783. C,,t, t,0. Na,,- 2Н,0 Найденоs 39,440; Н З.,780.

Полученные соединения были подвергнуты фармакологическим исследованиям.

Оценены терапевтические свойства схседуюш,юс соединений г

А 1э2-5э6-диангидро-3,4-диаце- ткшдульцита (Д1 А С Д А Д);

В 152-55б диангидро-3,4-бис- -(-карбометоксипропионил)-дульцита (Д1 Su Д А Д -- диметиловьЕй сложный эфир)j

С 1 5 2-5 -1 6 диангидро-3 4--бис- - (fi -фенилнропионил) --дульцита;

С-2 1э2-5S6-диангвдро-З54-бис- -(р-карбоксипропионил)-дульцита (Д1 Su Д А Д)I

, 1 э2-5,6 диaнгидpo 3-(p- кapбo:i :cипpoпиoнил) -4-ацетилдуль50

цита;

-:)

- 1 ,,2-о 5б-диангидро-3-(Р--карбохсипропионил) 4-(3-карбометок- сипропионил)-дульцита;

С-6 1 э2-5 5б -диангидро-3-(8- карбоксипропионил) -4-(р фенил- 55 лропиоиил)дульдита.

Указанные соединения, где А, В и С являются днсложными эфирами в 3 .4-полож.зкии 15 2-5,6-диангидро3

дульцита (Д А Д), не содержат никаких свободных .карбоксильных групп. Соединения С-2, С-4, С-5 и С-6 также являются дисложными эфирами в 3,4-по ложении Д А Д, но соединение С-2 содержит две, а соединения С-4, С-5 и С-6 одну гидроксильную группу.

Осуществлены следующие исследования :

усвоение энзима;

тест на токсичность;

определение дозовой зависимости

ингибирования роста опухоли, гема- токсичности и летальных эффектов для близких соединений, полученной отдельно на одинаковых моделях;

терапевтические индексы, полученные на различньпс твердых, способньЕХ к трансплантации опухолях грызунов;

ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома 180, влияние отдельной и повторяемых инъекций;

мутагенность.

Усвоение энзима:

Соединение В пытались превратить в соединение С-2 с помощью энзимного гидролиза при следующих условиях;

время: 0,5: 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; , ч; температура 37°С;

буфер: 1/15 М фосфата;

энзим: химотрипсин, трипсин, :ацилазаI , ацилазаД .

Согласно оценке при указанных условиях все сложно эфирные соединения В расщепляются с одинаковой скоростью. Следовательно, метиловый сложный эфир не может быть селективно разложен и трансформирован в кислотную форму.

- О

7 СО (сн)- с

7 осн.

о

Острая токсичность:

В табл. 1 приведены данные острой

токсичности.

Найдено, что соединение С-2 наименее токсично из всех близких по структуре соединений как для мьшш, так и для крыс.

Дозовая зависимость ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для соединений.

25487

близк гх; к получекная отдельно на одинаковых моделях:

метод: самцам крысы Wistor лекарства были введены через 24 ч после J заражения 2 х 10 клетками Walker, Эффективность определяли по дозам, вызываю ци 50%-ное ингкбирование опухоли при взвешивании на десятьш день. Дозы, приводящие к 50%-ному Q уменьшению гранулоцитов, оцененных на четвертый день, служили в качестве основ для сравнения гематоксичности. Отношение минимальной летальной дозы -.( ) к минимальной эффектив- JJ ной дозе (МЕД ЕД) рассматривали как терапевтический индекс.

Согласно данным табл. 2 соединение С-2 активно против опухоли в такой же дозовой области, как производные 2Q близких по структуре соединений А, В и С (ЕДдс, 13-17 мкмоль/кг) , в то время, как соединение С-2 менее токсично (более чем в два раза), чем все другие вещества, указанные здесь. 25 Следовательно, терапевтический индекс С-2 в два раза олее предпочтителен, чем индекс любого другого члена группы.

Терапевтические индексы, полученные на различггых твердых трансплантируемых опухолях грызунов, даны в табл. 3.

Ингибирование роста опухоли в твердой системе:

Саркома 180: влияние отдельной и 35 повторяемых инъекций.

Метод: небольшие образцы твердой Саркомы 180 были инокулированы на кожу самца мыши Swiss. Интраперито- нальное применение лекарства к груп- пе из шести животных начали на следующий день, на 1 1-й день опухоли были удалены для. оценки.

Данные отдельной и повторяемых инъекций на ингибирование рбста опу- холи в твердое системе Саркома 180 . приведены в табл. 4.

Отсутствие мутагенности соединения С-2 в анализе Салмонелла/микро- 50 сома:

Все испытуемые производные алкилир 1ощих сахарных спиртов за исклю. чением С-2 были мутагепны в

ТА 1535 и ТА 100 по результатам ана- 55 лиза Салмонелла/микросома. Данные относительно мутагенных и токсичных эффектов 1,6-дибром-дульцнта, 1,2- -5,6-диангидродульцита, 1-бром-3,5-

30

амгигфодульцита и 1,2-эпокси-З,5- -ангидроду.гг1,цнта известны.

, Даже с использованием MHKpocoMHbrX знзк-тол, полученных не только из пе крысы, но из легкого кры- сг,, лочки ИЛИ печени хомяка, соедикение С-2 не проявляет мутаген- п,)сгу; : штстжам ТА 1535 и ТА 100. Соедка-Еение С-2 также не проявляет нуга reiiHocTH к штаммам ТА 1357, ТА 1538 и ТА 98 в присутствии или отсутствие смеси S-9, полученной из гачг- -к крысы.

Мутагенность соединений А и В пред С ; «.Б л сна в табл. 5 и 6.

Сс л л.ясно эксперименту соединение оказалось немутагенным. Это кгггпострируется тем, что концентрация сое,гг11иеиия С-2 вплоть до 10 микро (р;:1-.|:.;/т1,|Т.стиика не уменьшает числа бак - f :).иальных клеток, произрастающих 3 : О: /мальной среде.

С,чПако соединение В вызывает 1 О-14-кратное увеличение числа бак- тергальных клетокj произрастающих в чорГ ;гльной среде.

С д.ругой стороны, соединение В 3b 3bi; ja.rfo ()--1 4-кратное увеличение числа репертантных пластинок, в то врет. ;я как высокая концентрация в 10 -гакрограмм/пластина является:

s ОКС. .

Сог ласно сравнению токсикологичес лкх и шapмaкoлoгичecк s; данных, мутаген; ;ости и результатов экспериментов по усБоег ию Э -:зимов свободные карбок си.т;.ьные группы в соединениях €-2, С-З, С-6 проявляют такие биоло гтгнеские свойства молекул, которыми не (адают молекулы, не содержащие свободньж карбоксильных групп.

1,Характеристические данные анти опу олевой активности соединений А,

В и С, оцененные на трансплантированных опухолях, являются существенно менее предпочтительными по сравнению с характеристическими данными соединений С- 2, С-4, С-5 и С-6, содержащи {свободную карбоксильную группу.

2,Терапевтические индексы соединения 3j содержащего две карбометок- ; и-группъ1, являются также менее пред почгительными по сравнению с такими же свойствами соединений С-2, С-4, С-5 к С-6. 1 1з этого можно предполо- жит:о,; что карбометокси-пропионильная пруп:па5 замещающая 1 ,,6 диaнгидpo дyJ f лVi.мt (Д А Д) в 3 и/или 4-м поло0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

жениях,, не вызывает увеличения терапевтической активности, как свободные карбоксильные группы, замещающие Д А Д и таких же положениях.

3.Отсутствие мутагенности в случае соединения С-2,, содержащего свободные карбоксильные группы (в противоположность други 1 мутагеннЕ,1м произ- водньгм бифункционального гексита, особенно соединения В, содержащего две карбометокси-группы), показывает, что присутствие карбоксильной группы вносит существенные изменения в биологическую эффективность.

Мутагенность соединений А и В представлена в табл. 6.

4.Энзимная система живого органа не способна к трансформации соединения В в соединение С-2,, содержащее свободную карбоксильную группу.. Следовательно, соединение В не может рассматриваться, как предщественник соединения С-2. Это иллюстрируется

не только существенным биологическим различием, но также включенными здесь результатами экспериментов по усвоению энзимов.

5 . Терапевтическая активность соединения А, содержащего две ацетильные группы, существенно ниже терапевтической активности соединения С--4 5 содержащего не только ацетильную, но также и карбоксильную группу.

6,Соединение С, содержащее две фенилпропионильные группы, обладает менее, предпочтительной терапевтической активностью, чем соединение С-6, И У1еющее одну р-фенилпропионильную

и одну свободную карбоксильную группы.

7.Предпочтительный терапевтический индекс соединений С-2, С-4, С-5 и С-6 проявляется в результате существенного уменьшения токсичности, которая связана с наличием свободных карбоксильных групп. Терапевтический индекс соединений С-2, С-45 С-5 и С-6 в 8-15 раз лучше, чем терапевтический индекс соединений А, В и С, что является неожиданным и непрогнозируемым для соединений подобной структуры. Небольшое изменение химической структуры принесло су1цест- венное изменение характеристик фарма- кологи-ческих свойств. Такое улучшение терапевтического индекса, осуществленное изменением одной группы

в молекуле, является неожиданным, непрогнозируемым и неочевидным.

Таблица 1

Терапевтический индекс, указанньй в-Декларации, относительно соединений А и С-2.

Продолжение табл. 1

Величины в скобках являются опубликованными, в то время они были модифицированы за счет повторения экспериментов.

Терапевтические индексы также опубликованы.

Таблица 3

Таблица 4

Данные в скобках получены после продкярительной чнхуйлцнп (S-смесь бактерии + С-2 за исключением верхней части агара) в течение 30 мни при 37 С.

176

240

193.

219

31 токсично

17

ВНИИПИ

Заказ 1971/62

Тираж 379

Подписное

Производств.-полиграф, пред-е, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таллина 5

Тираж 379

Подписное

. Ужгород, ул. Проектная, 4