Изобретение относится к новым химическим биологически активным соединениям ряда гекситов, конкретно к производным дульцита, обладающим ингибирующим действием в отношении злокачественных опухолей,
Цель изобретение - повышение терапевтической активности соединений ряда дульцита при снижении их токсичности с
Пример Г, Получение катализатора палладий-на-угл8.
0,2 г хлористого палладия растворяют в 2 мл дистиллированной 5,7 г хлористо-водородной кислоты при нагревании раствор разбавляют пятикратно водой, затем добавляют 0,9 г активированного угля (Мерк), и суспензию кипятят в течение нескольких минут. Суспензию охлаждают и после этого подщелачивают (до рН«9 с использованием 20%-ного водного раствора гидроокиси натрия при встряхивании так, чтобы раствор над твердым , веществом стал совершенно бесцветным
0,2 хлористого палла1дия растворяют в 2 МП дистиллированной 5,7 н хлористо-водородной кислоты при нагревании, раствор разбавляют 80 мл дистиллированной водь1, и добавляют 9,0 г активированного угля (Мерк). Результирующую суспензию подщелачивают описанным вьпие путем.
Суспензии, полученные по методикам пунктов а) и б) , смешивают, тщательно перемешивают и катализатор отфильтровывгиот, промывают до устранения хлоридов на фильтре, и после этого промывают с использованием 200 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Мокрый катализатор сушат в эксикаторе над концентрированной сер-ной кислотой.
Приме р 2. Получение 1,2-5,6 диангидро-3,4-бис-(-карбокси- пропионйл -дульцита 1,6 г /3 ммоль 1,2-5а6-диангидро-3,4-бис-(|3 -бензипрксикарбонилпропионил) г-дульцита растворяют в 150 мл сухого метанола к раствору добавляют 0,3 г катализатора, полученного по методике примера 1 , и полученную смесь гидрируют д отбора теоретического количества, водрода. На зто требуется около 1,5 ч. Катализатор отфильтровывают, раствор испаряют в вакууме, полученное белое кристаллическое вещество суспендирую в эфире, и отфильтровывают сухое вещество. Полученное вещество перекрис-Твилизовывают из смеси диэтилового эфира и петролейного эфира с П9лучением 1,0 г (96%) I,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(Я -карбоксипропионил)-дульцита (соединение С-2) т.пл. 138139°С. При анализе методом тонкослойной хроматографии (Rf 0,15 с использованием смеси (9:2) бензола и метанола и проявлением п -нитробензилпиридином) продукт однороден.
Вычислено, %: С 48,78; Н 5,73; О 45,49.
СцН,зО,„ (346,29) Найдено, % С 48,35; Н 5,25; О 46,60.
Эквивалентная масса: Вычислено 173, Найдено, 180.
ИК-спектр: 3350 см (карбоксил), 0 1235 (зпокси), бензильные и гидроксильные полосы отсутствуют.
Растворимость: соединение хорошо растворяется в спирте и тетрагидрофуране, плохо растворимо в диэтило5 вом эфире и воде.
Примерз. Получение 1,2-5,6-диангидро-З- (/9 -карбоксипропионил) г4-ацетилдульцита (соединение с-з).
Q 3,78 г (10 ммоль) 1,2-5,6-диaнгидpo-3- /3 -бензилоксикарбонилпропионил)-4-ацетилдульцита гидрируют аналогично примеру 2 до прекращения отбора водорода. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и кристаллический остаток/ перекристаллизовывают из смеси тетрагидрофурана и этилацетата. Получают 3,5 г (88%) 1,2-5,6-диангидро-3- (|3 -карбоксипропионил)-4-ацетилдульцита; т.пл. 134с. По данным тонкослойной хроматографии (Rf 0,2 или 0,6, смесь (б:4) зтилацетата и циклогексана или смесь (8:2) бензола и метанола, проявление п-ниТробензилпиридином) продукт однороден.
Вычислено, %: С 50,00; Н 5,59; О 44,40
(288,26)
° Найдено, %: С 49,48; Н 5,26; О 44,70
Эквивалентная масса: Вычислено, 288 Найдено 296.
П р и м е р 4. Получение 1,2-5,6-диангидро-3-(р -карбоксипропионил)-4-(/ -карбометоксипропионил)дульцита (сЪединение С-4) 4,50 г .
(10 ммоль) 1,2-5,6-диaнгйдpo-3-(p -бензилоксикарбонилпропионил)(/3 -карбометоксипропионил)-дульцита гидрируют аналогично примеру 2 до отбора расчетного количества водорода. Катализатор отфильтровывают и растворитель отгоняют из фильтрата. Получают 3,1 г (86%) кристаплического 1,2-5,6-диангидро-3-(/3 -кагбрксипропионил)-4- ( -карбометоксипропионил -дульцита, т.гш. 8789с. По данным тонкослойной хроматографии (Rf -0,25 или 0,4, смесь (6:4 ) этилацет ата и цикпогексана или смесь 8:2 бензола и метанола продукт однороден.
Вычислено, %: С 49,72; Н 6,12; О 44,14.
(362,4)
С 49,87; Н 5,39;
Найдено, О 43,91
Эквивалентная масса:
Вычислено 362
Найдено 363
Примерз. Получение 1,2-5,6-диангидро-3-f -карбоксипропионил -4-(я |-фенилпропионил)-дул|ьцита (соединение С-5).
4,68 г (10 ммоль) 1,2-5,6-диан- гидро-3- (/3 -бензилоксикарбонилпропионилJ-4-(ft -фенилпропионил)-дульцита гидрируют аналогично примеру 2. Катализатор отфильтровывают и растворитель отгоняют от фильтрата с получением 3,3 г (84%) кристаллического 1,2-5,6-диангидро-3-(/ -карбоксипройионил -4-( |i -фенилпропионил)дульцита, т.пл. 80°С. По данным тонкослойной хроматографии (Rf 0,3 или 0,7, смесь 6:4 этилацетата и циклогексана, или смесь 8:2 бензола и метанола) продукт однороден.
йлчислено, %: С 60,31} Н 5,86; О 33,83
C H zOg378,38
Найдено, %: с 60,60; Н 5,49; О 34,50
Эквивалентная масса:
Вычислено 378
Найдено 390.
Новые производные дулыщта (соединения С-2, С-3, С-4 и С-5) были подвергнуты биологическим исследованиям. Их биологическую активность сравнивали с активностью близких структурных аналогов:
Соединение А- 1,2-5,6-диангидро-з -3,4-диацвтилдулы;итол; соединение
В - 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(Д -карбометоксипропионил)-дульцитол; сое :щнение С - 1,2-5,6-диангидрО -3;4-бис- (f -фенилпропионил)-дульцитол;
Были осуществлены следующие исследования: усвоение энзима; тест на токсичность; определение дозовой зависимости ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для близких соединений, полученной отдельно на одинаковых моделях; терапевтические индексы, полученные на различных твердых, способных к трансплантации опухолях грызунов; ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома 180; влияние отдельной и поЬторяеьаох инъций; мутагенность.
Получены следующие экспериментальные разультаты.
Усвоение энзима.
Соединение В пытались превратить в соединение С-2 с помощью энзимного гидролиза лри следующих уелоВИЯХ:
Время: 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 24,0 ч; температура 37°С; буфер 1/15 М фосфат; энзим:-химотрипсин. Трипсин, ацилаза Т, ацилаза П.
Согласно оценке при вышеуказанных условиях все сложноэфирные связи соединения В расщепляются с одинаковой скоростью. Следовательно, метиловый эфир не может быть селективно разложен и трансформирован в кислотную форму,
I1II
Ш-0-f СО-|СН2| С-ОСНз
О
Т а б л
и ц а 1 Острая токсичность , Результаты исследований острой токсичности новых производных дульцита
36
25,5
75
52
150
80
Продолжение табл.1
на нормальных самцах мыши Swiss весом 2731 г.После одной инъекции группа из 6 мышей при одной дозе была прослежена в течение 21 дня. определяли на крысах Wi st ar-Walker, больных раком. Инъекции лекарства давали через 24 ч после трансплантации опухоли группе из 6 и веЪи наблюдения в течение IО дней
Дозовая зависимость ингибирования роста опухоли, гематоксичноЪти и летальных эффектов новых производных дульцита
Бьшо найдено, что соединение С-2 наименее токсично из всех близких по структуре соединений как для мышей, так и для крыс (табл. 1).
, Дозовая зависимость ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для близких соединений, полученная отдельно на одинаковых моделях.
Метод. Самцам крысы Wistar лекарства были введены через 24 ч после заражения 2х10 клетками Walker. 5 эффективность определяли по дозам, вызывающим 50%-ное ингибирование опухоли при взвешивгшии на десятый день. Дозы, приводяпще к 50%-ному уменьшению гранулоцитов, оцененных на четвертый день, служили в качестве основы для сравнения гематоксичности. Отношение минимальной летальной дозы () к минимальной эффективной дозе () рассматривали как терапевтический индекс.
Согласно данным табл.21 как было найдено, соединение С-2 активно против опухоли в такой же.дозовой области, как производные близких по структуре соединений А, В и C/ED Q З 17 ммоль(кг); в то время как соединение С-2 более чем в два раза ьюнее токсично, чем все другие вещества, 5 указанные здесь; следовательно, терапевтический индекс С-2 в два раза более предпочтителен, чем индекс любого другого члена группы. ,
Таблица
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ получения производных дульцита или их солей | 1981 |
|
SU1205769A3 |
Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ -карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли | 1982 |
|
SU1225487A3 |
Производные дульцита или ксилита,обладающие цитостатическим действием | 1980 |
|
SU979315A1 |
Способ получения замещенных ксилита или гексита | 1980 |
|
SU1075975A3 |
Способ получения ацильных производных диангидрогекситов | 1975 |
|
SU581860A3 |
N-Нитрозо-N-(бэта-хлорэтил)-карбамоилпептиды или их хлоргидраты,обладающие противоопухолевой активностью | 1983 |
|
SU1414851A1 |
Способ получения N-нитрозо-N-(бета-хлорэтил)карбамоилпептидов или их солей | 1984 |
|
SU1586520A3 |
Способ получения производных 1,2-4,5-диангидроксилита | 1979 |
|
SU984410A3 |
Способ получения N-нитрозо-N-(бэта-хлорэтил)-карбамоилпептидов или их кислотно-аддитивных солей | 1982 |
|
SU1424739A3 |
Конденсированные производные @ -триазина,проявляющие антидепрессивную активность | 1981 |
|
SU1041545A1 |
Производные дульцита общей формулы CH2--eH-(JH-CJH-CH-CH2 о ОЯ1 OR2 и (I) . где Е и к ьС-СНгСН2.-ССЮН; ,-С-СН7.СН2С-ОСНз и 0 RZ -С-СН СНгСООН; . .« R.-C-СНз 0 йг-С-СН СН СООН; b N -С-СН2СН2СООН QD 4 0 00 R« -С-СН2СН2-СбН5, а со обладающие ингибирутцим действием в отношении злокачественных опухолей. SU.,,, 1194863 C5D4 С 07 D 303/16, 407/12, А 61 К 31/335 ТЕНИЯ /М
К25,5
3 7 12,5
В52
С80
5,6 1,3 3,6
Терапевтический индекс относительно соединения А.и .
Результаты исследования терапевтических индексов новых соединенийна раТерапевтические индексы, полученные на различных твердых трансплантируемое опухолях грызунов
Примечание: Величины, « гурирующие в скобках, являются
опубликованными величинами, но они были модифицированы за счет повторения экспери.ментов.
Ингибирование роста опухоли в Метод. Небольшие образцы твердой дои системе.CapKONbt 180 были инокулированы на коСаркома 180: влияние отдельной ижу самца ьолпи Swiss. Интраперитональповторяемых инъекций,ное применение лекарства к группе
8
1194863 Продолжение табл.2
зличных твердых,способныхк трансплантации опухолейгрызунов,даны в табл.3.
Таблица 3
9119486310
из шести животных начали на следую-удалены для оценки. Результаты предщий день , на 11-й день опухоли были Ингибирование роста опухоли в системе саркома 180
8,7
1
П
1
40
1
8
9,3
8
23
8
10,5
8
2
10
8
3
15
8
4
12,9
8
5
Отсутствие мутагенности соединения С-2 в анализе салмонелла/микроВсе испытуемые производные алкилирующих сахарных спиртов, за исключением С-2 были мутагенны в штаммах ТА 1535 и ТА 100 по результатам анал за салмонелла микросома. Данные относительно мутагенных и токсичных эффектов 1,6-дибром-дулцитола, 1,2-5,6-диангидро-дулцитола, 1-бром-3,6-ангидро-дулцитола и 1,2-эпокси-З.б-ангидро-дулцитола известны и описаны. Даже с использованием микросомных энзимов, полученных не только
ставлены в табл. А.
Таблица
2,4
4,6 5,4 6.7 10 4,3
16,4
15,7
4,5
8,0
6,5
4,8
64 18 2,5 4,0
15,2 4. 16,3 из печени крысы, но также из легкого крысы, почки мыши или печени хомяка, соединение С-2 не проявляет мутагенности к штаммам ТА 1535 и ТА 100. Соединение С-2 также не проявляло мутагенности к штаммам ТА 1537, ТА 1538 И ТА 98, в присутствии или отсутствии смеси 3-9, полученной из печени крысы. Мутагенность соединений А, Ъ и С представлена в табл. 5 и 6.
Отсутствие мутагенности соединения С-2 в штаммах TA-15S5 и ТА 100 т скобка получены после предварительной инкубации (S чешем BepineM части агара) в течение 30 мин при }7с..
Мутагенность соединений А и В
Согласно экспернменту соединенне С-2 оказалось немутагенным.
Это иллюстрируется тем фактом, что концентрация соединения С-2
Габляа 5
Т а б Л иц а 6
55 вплоть до 10 мк/г,/пластинка не уменьшает числа бактериальных клеток, произрастающих в нормальной среде. смесь вакт«р||Я«С-2 «а ясклв
13
Однако соединение В вызывает 1014-кратное увеличение числа бактериальных клеток, произрастающих в нормальной среде.
С другой стороны, соединение В вызывает 10-14-кратное увеличение числа реверантлых пластинок, в то время как концентрация 10 мк/г,/пластинка|1 как было , является то1к2,йчной.
лйравнение токсикологических свойЬтв и фармакологических данных и мутагечнрс%% | экспериментов по усовению .энзимов показывает, что наличие свободных карбоксильных групп в соединениях С-2, С-3, С-4 и С-5 позволяет им проявлять такие биологические свойства, которыми не обладают молекулы,не содержащие свобоных карбоксильных групп.
Характеристические данные противоопухолевой активности соединений А, В и С, оценные на трансплантированных опухолях, являются существенно менее предпрчтителы1ыми по сравнению с характеристическими данными соединений С-2, С-3, С-4 и С-5 содержащих свободную карбокснльнук) группу.
Терапевтические индексы соединения В, содержащего две карбоксигруппы, являются также менее предпочтительными по сравнению с такими же свойствами соединений С-2, С-3, С-4 и С-5. Из зтого можно предположить, что карбометоксипропионильная группа, замещающая 1,2-5,6 диангидро-дулцитол (DAD) в З и/или 4 положения не вызывает увеличения терапевтической активности, как свободные карбоксильные группы., замещающи DAD в таких же положениях.
Отсутствие мутагенности в случае соединения С-2, содержащего свобод486314
ные карбоксильные группы, в противоположность другим мутагенным производным бифункционального гексита, особенно соединения В, содержащего 5 две карбометоксигруппы, показывает, что присутствие карбоксильной группы вносит существенные изменения в биологическую активность.
Энзимная система живого органа не to способна к трансформации соедиения В в соединение С-2, содержащее свободную карбоксильную группу, следовательно, соединение В не может рассматриваться как предшественник соtS единения С-2. Это шшюстрируется не только существенным биологическим .различием, но также включенными здесь результатами экспериментов по усвоению энзимов. 20
Терапевтическая активность соединения А, содержащего две ацетильные группы, существенно ниже терапевтической активности соединения С-4, 25 содержащего не только ацетильную, но также и карбоксильную группу.
Соединение С, содержащее две фенилпропионильные группы, обладает менее предпочтительной терапевтической активностью, чем соединение С-5, имеющее одну fb -фенилпропионильную и одну свободную карбоксильную группу.
Предпочтительный терапевтический индекс соединений С-2, С-3, С-4 и 5 С-5 проявляется в результате существенного уменьшения токсичности, которая связана с наличием свободных карбоксильных групп. Терапевтический индекс соединений С-2, С-3, С-4 и С-5 0 в 8-15 раз лучше, чем терапевтический индекс соединений А, В и С, что является неожиданным и непрогнозируемым для соединений подобной структуры.
Способ определения послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений | 1987 |
|
SU1490649A1 |
Способ восстановления хромовой кислоты, в частности для получения хромовых квасцов | 1921 |
|
SU7A1 |
Шеститрубный элемент пароперегревателя в жаровых трубках | 1918 |
|
SU1977A1 |
Прибор для наглядного представления свойств кривых 2 порядка (механические подвижные чертежи) | 1921 |
|
SU323A1 |
Proceedings of the lOth International Congress of Chemotherapy, Washingtcm, D..C., 1978, V | |||
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов | 1917 |
|
SU2A1 |
Автоматический аэропланный стабилизатор | 1924 |
|
SU1302A1 |
Авторы
Даты
1985-11-30—Публикация
1982-05-18—Подача