Способ получения в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-/2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо/-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата с галогенидами металлов Советский патент 1990 года по МПК C07D501/46 A61K31/546 

внутривенных инфекций без использования буферов или оснований,

Примеры приведенные ниже, иллюстрируют изобретение.

Пример 1. Получение и испытание комплекса цвиттерион:хлорид натрия 1:1.

В сосуд, снабженный мешалкой, вносят 800 мл водного раствора, содержа- щего 250 г цвиттериона, при перемешивании со средней скоростью, добавляют 30,41 г хлорида натрия для обеспечения молярного соотношения цвиттерион: :хлорид натрия 1:1. Добавляют воду для инъекций, отвечающую требованиям Фармакопеи США (USP), до 1 л. Продолжают перемешивать раствор 15 мин, далее - с- интервалами 5-10 мин до тех пор, пока пробы, отобранные между ин- тервалами при перемешивании, не будут показывать существенного количества нерастворенных частиц. Полученный раствор переносят в автоклав из нержавеющей стали для работы при повышен ном давлении. Раствор выпускают из автоклава, пользуясь сжатым азотом, через установку со стерилизованным фильтром, снабженным предфильтром и фильтром для стерилизации, в чистый стерилизованный сборник. Затем 4 мл порции (1 г активHOCTHJ обусловленной цвиттерионом) вносят асептически в стеклянные колбы 10 мл„ После заполнения колбы закрывают пробками, служащими для лиофилизации. Колбы помещают на лотки для лиофилизации, которые закладывают в лиофилизатор, где продукт вымораживают 4 ч при (-30) - (-iO)°C. Затем температуру в присое- динеином к лиофилизатору конденсаторе выдерживают при (-60) ± 3°С и установку для вымораживания выключают. Когда температура в конденсаторе достигеет -50 С, вакуум-насос выключают. Когда уровень вакуума достигает 200 мкПз, температуру на полке устанавливают на уровне -13±3 С и поддерживают в течение 16-13 ч. Затем доводят температуру на полке до +25°С. Температуру +25±2°С поддерживают 48 ч. Цалее лиофилизатор выкпючают и вынимают колбы. Продукт - аморфное твердое вещество - характеризуется как комплекс цвитте- рион:хлорид натрия 1:1.

Вычислено, %: С 42,34; Н 4,49; N 15,59; S 11,60; HaO(KF) отсутствие; Na (сульфатированная зола) 4,27; С1 6,58.

0 « 5 п е

5

Cfg Н24NC 0,5-52ClNa.

Найдено (корректирование для воды) , %: С 41,96; Н 4,57; N 14,73; S 12,28; Н20 (KF) 1,80; Na (сульфатированная зола) 3,15; С1 6,85.

Никаких существенных различий при инфракрасном анализе между данным продуктом и цвиттерионом не отмечено. Однако определенная по методу дифференциальной сканирующей калориметрии точка разложения была измерена экзотермически при 197,4°С, что заметно отличается от таковой для цвиттериона (173,84 С)о Это указывает на тоэ что данный продукт представляет собой соединение, отличающееся от цвиттериона.

Тот же продукт получают добавлением 10-20 объемов изопропанола в сборник, содержащий водный раствор цвиттериона и хлорида натрия, для образования осадка3 отделения его с применением вакуумного фильтрования, промывки осадка изопропанолом и высушивания в высоком вакууме. Продукт получают в сухой форме.

Для оценки широкого спектра активности определяют минимальные инги- бирующие концентрации (МИК) данного продукта и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавления агара (агар Мюллер-Хинтона). Полученные данные приведены в табл. 1 (Бристоль А N соответствует особому виду микроорганизма) .

Приведенные в табл.1 данные указывают на то, что полученный продукт, т.е. комплекс цзиттерион:хлорид натрия 1:1, имеет эквивалентную микробиологическую активность по сравнению с цвиттерионом.

Токсичность комплекса цвиттерион: :хлорид натрия 1:1 испытывают на крысах Sprague-Dawley путем однократного внутривенного введения болюса. LD 50 для комбинированных данных из 2 исследований составляет 796 мг/кг с 95%-ны- ми лимитами, достоверность между 759 и 832 мк/кг„ Эти данные подлежат сравнению с ТЛ)50 669 мк/кг и 95%-ными лимитами достоверности между 618 и 732 мг/кг для цвиттериона. Ответные кривые были параллельными, однако по эффективности действия данный продукт был менее токсичен, чем цвиттерион.

Стабильность при повышенной температуре определяют после хранения комплекса цвиттерионiхлорид натрия 1:1 и цвиттериона в сухом порошкообразном

состоянии по утрате эффективности действия путем анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Показатели утраты эффективности действия представлены в табл.2. Пределы показывают крайние значения для множества опытов.

Стабильность водного раствора комплекса цвиттерион:хлорид натрия 1:1 определяют путем изменения структуры при различных концентрациях после хранения при 25°С в течение установленных периодов времени. Изменение структуры путем разбавления до 250 мг/мл (номинально) проводят стерильной водой для инъекций, отвечающей требованиям фармакопеи США (USP). Для последующего разбавления используют 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Данные представлены в табл.3. Пределы показывают крайние значения для множества опытов.

Данные табл. 3 свидетельствуют об удовлетворительной стабильности водного раствора комплекса цвиттерион: :NaCl 1:1 по меньшей мере в течение 24 ч при 25°С (комнатная температура)

П р и м е р 2. Получение и испытание комплекса из цвиттериона и хлорида кальция.

4,6 г цвиттериона растворяют в 14 мл воды для инъекций, содержащей 950 мг хлорица кальция (1 мол.-экв).

Полученный раствор пропускают через 0,22 мк стерильный фильтр.

Фильтрат добавляют при асептически условиях и быстром перемешивании с интервалом 5 мин к 400 мл абсолютного этанола, Образуется аморфный осадок.

Смесь взмучивают в течение 0,5 ч.

Твердое вещество отделяют вакуум- фильтрованием и промывают 40 мл этанола, который добавляют к фильтрату (обозначен как фильтрат А).

Твердое вещество, влажное от этанола, взмучивают в 100 мл абсолютного этанола 0,5 ч. Полученное аморфное твердое вещество отделяют вакуумным фильтрованием, промывают 20 мл этанола, 50 мл эфира, затем высушивают в высоком вакууме при 50°С 4 ч, что дает 2,2 г продукта, содержащего цвнт- терион и хлорид кальция в молярном соотношении 2:1„

Вычислено, %: С 42,56; Н 4,51; N 15,68; S 11,96; С1 6,6; Са (в виде золы) 3,73.

5

0

5

,505S2(CljCa)0fi. . . Найдено, %: С 38,4; н 4,85; N 13,76; S 8,82; С1 5,44; Са (в виде золы) 3,59; HZ0 (KF) 7,79.

Найдено (сухое основание), %: С 41,65; N 14,92; S 9,57; С1 5,9, Са (в виде золы) 3,89.

Фильтрат А концентрируют в вакууме Q при 35°С до 30 мл. Получают весьма плотные, сходные с кубической формой микрочастицы, показывающие отсутствие двойного преломления.

Плотные твердые частицы вещества 5 отделяют вакуумным фильтрованием, промывают 15 мл абсолютного этанола, затем 20 мл эфира и высушивают, что дает 2,0 г аморфного твердого продукта, представляющего собой цвиттерион с хлоридом кальция в молярном соотношении 1,5:1 (сескви-цвиттерион).

Вычислено, %: С 41,1; Н 4,5; N 14,7; S 10,8; С1 8,33, Са (в виде золы) 4,8.

(Cf9H N605S) 1iS СаС12. Найдено, %: С 37,35; Н 5,17; N 12,37; S 10,24; С1 7,84; Са (в виде золы) 4,47; Н20 (KF) 3,24; этанол О,5 моль.

0 Найдено (НгО и основание, не содержащее этанол), %: С 40,01; Н 4,88; N 13,3; S 10,57; С1 8,3; Са (в виде золы) 4,7.

Растворимые и нерастворимые в этаноле комплексы не показывают существенного отличия по данным высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) и ультрафиолетовых спектров от цвиттериона.

Для оценки широкого спектра активности данного продукта определяют минимальные ингибирующие концентрации (МИК) для продукта цвиттерион:хлорид кальция при молярном соотношении 5 и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавления агара (агар Мюллер-Хинтона). Полученные данные представлены в табл.4, где особые виды микроорганизмов отмечены как 0 Бристоль A N:

Стабильности при повышенной температуре определяют после хранения продукта цвиттерион:хлорид кальция при молярном соотношении 1,5:1 и цвиттег 5 риона в сухой порошкообразной форме по утрате потенциальных свойств методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Утрата потенциальных свойств показана в табл.5, где

5

0

пределы указывают крайние значения для множества опытов,

П р и м е р 3. Изучение термической стабильности.

Получают лиофилизированные композиции из цвиттериона и хлорида натрия или хлорида кальция и определяют их стабильность при различных температурах. В табл. 6 показаны значения остаточной активности по данным анализа таких композиций методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC).

Комплекс цвиттерион:хлорид натрия 1:1 пригоден для фармацевтического применения, обладает широким спектром действий, свойственным антибиотику, и в значительной степени равен таковому у цвиттериона о Как видно из пров«:ден- ных испытаний, данный комплекс имеет удовлетворительную стабильность з растворе, по меньшей степени равную 24 ч при 25°С (при концентрации 250 мг/мл цвиттериона в стерильной воде существует менее чем 10%-ная утрата активности, определяемая анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии)„ В отличие от цвиттериона имеет удовлетворительную стабильность при повышенной температуре для сухой порошкообразной формы (около 10%-ной утраты после 4-недель- ного хранения при 45°С), что определе но путем высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), и исключительную стабильность для формы в виде сухого порошка при обычных для холодильника температурах (утрата отсутст1 вует при 6-месячном хранении при 4 С) во время всего 24-часового периода, после которого упомянутый выше комплекс изменяет структуру, обеспечивая пригодную для инъекций композицию (т.е. после изменения структуры до обеспечения концентрации, пригодной для инъекции). Композицию, пригодную

для инъекции, поддерживают при удов-i летворительном значении рН, т.е. в пределах от 4,2 до 6,2, без применения буферов или оснований. Упомянутый выше комплекс менее токсичен, чем цвит- терион.

Рассматриваемые композиции переводят в композиции, пригодные для инъекции путем Разбавления стерильной водой и/или физиологическим раствором для обеспечения композиций с активностью цвиттериона, базирующейся на концентрации в пределах от 1 до 400 мг/мл,

как определено анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), предпочтительно в пределах от 2,5 до 250 мг/мл. Разбавление до 250 мг/мл целесообразно проводить,

Q используя стерильную воду для инъекций, отвечающую требованиям Фармакопеи США (USP)р а если понадобится дальнейшее разбавление,, то берут 0,9%-ный раствор хлорида натрия по USP. Для

5 внутримышечного или внутривенного введения с лечебной целью взрослому .человеку общую суточную дозировку в пределах от 750 до 3000 мг разделяют на достаточные дозировки.

Композиции транспортируют и хранят в сухом состоянии в условиях обычного холодильника (например при 4°С), причем они должны оставаться активными более чем на 90% в течение по меньшей мере 1-2 лет. Такие композиции легко превратить в композиции, пригодные для инъекции.

ормула изобретения

Способ получения в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(г)-меток- сииминоацетамидо J-3-(1-метил-1-пирро- лидинио)метил-3-цефем-4-карбоксштата с галогенидами металлов общей формулы

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения термически устойчивых комплексов 7-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо]-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата (X)) с галогенидами металлов - (NACL)_Z, где а)X и Y=1

Z*0

б)Y=0

X=1-1,5

Z=0,5-1, которые как антибиотики могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более термически стойких веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией водных растворов с концентрацией 100-400 мг/мл 7-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо]-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата с соответствующим молярным количеством NACL или CACL₂ с последующим выделением целевого продукта путем лиофилизации или косольвентного осаждения и, в случае необходимости, сушкой в вакууме. Воду для исходных веществ используют после стерилизации. В этом случае образуются вещества, способные при 4°С сохранять активность на 90% в течение 1-2 лет. 6 табл.

N

C-CONH-T--f

N ОСН3

о

а -

(наС1)у(СаС12);

отличающийся тем, что, в стерилизованной воде растворяют (2-аминотиазол-4-ил)-2-(г)-меток- сииминоацетамидо }-3-(1-метил-1-пирро- лидинис)метил-3-цефем-4-карбоксилат с получением его концентрации 100...

40 мг/мл и соответствующее молярное количество хлористого натрия или хлористого кальция и из раствора выделяют целевой продукт путем лиофилизации

Значения МИК (мг/мл)

Стабильность сухого продукта

или косольвентного осазвдения с последующей, в случае необходимости, сушкой в вакууме.

Таблица 1

9585 9604 20688 9537 9537 9606 20699 15199 20341-1 9664 20468 9659 9656 9900 21559 15153 22424 20019 9843a 21628

0,016 0,008 16 0,5 1 1

Более 0,16 0,016 0,016 0,5 0,016 0,03 0,008 0,03 0,008 0,13 0,03 0,5 2

125

0,016 0,008 16 0,5 1 1

125 0,16 0,003 0,06 1

0,016 0,06 0,016 0,03 0,016 0,25 0,03 1 3

Таблица2

ТаблицаЗ Стабильность в водном растворе

Таблица4 Значения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (мг/мл)

Стабильность сухого продукта

Рецептуры и процент остаточной активности

1 Д

3Д

1н

2н

4н 8 н

1н

2н н 8 н

3 н

4 н

н

3 н

3 н

70°С 70°С 56°С 56°С 56°С 56°С 45 °С 45°С 45° С 45°С 45°С 37°С 37°С 37°С 25 °С

66 54

45-58 39-43

70 79 39

69

85,2 76,6 81,9 73,9 67,7 55,9 91,7 87,5 84,2 76,2 67,4 90,4 85,4 80,9 93,7

ТаблицаЗ

Таблицаб

88,7 80,7 86,6 78,4 71,5 62,5 94,3 89,2 85,8 80,4 75,3 92,0 87,3 85,8 95,6