Питательная среда для культивирования MIcRococcUS LUтеUS ВКПМ В-2836 - продуцента сайт-специфической эндонуклеазы MLU1 Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 C12N9/22 C12N1/20 C12R1/265 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I.

Цель изобретения - повышение выхода биомассы и фермента.

На фиг. 1 и 2 представлены графики, отображающие рост культур.

Изобретение заключается в том, что в известной питательной среде для культивирования продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I в качестве источника аминного азота используют гидролизат казеина.

В качестве продуцента Сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I используют штамм М. luteus, полученный из Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов ВНИИ генетика, г. Москва, где хранится под номером В-2836

Пример 1. Эксперименты с жидкой средой проводят в качалочных колбах Эр- ленмейера вместимостью 750 мл в 100 мл среды при 30°С с качанием 200-220 об/мин. Концентрацию Клеток определяют по оптической плотности путем измерения на приборе фотоэлектроколориметр КФК-2 при длине волн 540 нм в кювете толщиной 5,05 мм.

Культуру выращивают на среде следующего состава, мас.%: гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлористый натрий 0,2; дистиллированная вода остальное. Данная среда соответствует минимальным концентрациям компонентов (фиг. 1, кривая

1)

Пример 2. Среда содержит мас.%: гидролизат казеина 2,0; дрожжевой экстракт 3,0; хлористый натрий 0,3; дистиллиО Ю СО О

.&.

рованная вода остальное. Данная среда соответствует максимальным концентрациям компонентов. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг. 1 рост представлен кривой 2. Как видно по кривым 1 и 2 минимальные и максимальные значения содержания компонентов среды показывают идентичные результаты.

Пример 3. Среда с концентрацией компонентов меньше предлагаемой, мас.%: гидролизат казеина 1,5; дрожжевой экстракт 2,5; хлористый натрий 0,1; дистиллированная вода остальное. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг. 1 рост клеток представлен кривой 3. Как видно по характеру кривой 3, в сравнении с кривыми 1 и 2, снижение концентраций компонентов приводит к уменьшению плотности клеток в конце роста.

Пример 4. Среда с концентрацией компонентов выше предлагаемой, мас.%: гидролизат казеина 2,5; дрожжевой экстракт 3,5; хлористый натрий 0,4; дистилли- рованная вода остальное. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг. 1 рост клеток представлен кривой 4. По характеру кривой 4 видно что увеличение кон- центраций компонентов среды выше предлагаемого значения к улучшению роста не приводит, но наблюдается торможение в фазе экспоненциального роста культуры.

Таким образом, предложенные концентрации компонентов являются оптимальными.

Пример 5. Совокупность компонентов в предлагаемой среде подобрана по результатам двухэтапного эксперимента.

В таблице представлены данные, подтверждающие, что штамм М. luteus предпочитает в своем развитии гидролизат казеина и дрожжевой экстракт (время культивирования 24 ч).

Пример 6, Культивирование проводят в ферментере вместимостью 30 л в 20 л

питательной среды, снабженном автоматической системой регулирования рН среды, температуры 30°С, воздух 20 л/мин, скорость перемешивания 500 об/мин, на двух

средах - предложенной и известной. Состав предложенной среды, мас.%: гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлори- хтый натрий 0,2; дистиллированная вида остальное. Состав известной среды, мас.%:

триптон (Dlfco) 1,0; дрожжевой экстракт (Dlfco) 0,5; хлористый натрий 0,5. Пробы отбирали, как указано на фиг. 2. Активность Mlii I определяли в грубом клеточном экстракте. Как видно по кривым фиг. 2, рост на

предлагаемой среде (кривая 5) в 4,6 раз лучше, чем рост на среде прототипа (кривая 6), при этом получают 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды в той точке (16 опт. ед.), которая соответствует максимальной активности

фермента 400-420 тыс. ед./г, в то время как выход биомассы на известной среде (кривая 6) составляет 7-9 г с 1 л среды и максимальная активность фермента около 90 тыс. ед./г.

Преимущество предложенной среды заключается в повышении у продуцента выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной среде.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования Micrococcus luteus ВКПМ В-2836- продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I, включающая источник аминного азота, дрожжевой экстракт, хлористый натрий и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода биомассы и фермента, она содержит в качестве источника аминного азота гидролизат

казеина при следующем соотношении компонентов, мас.%: гидролизат казеина 1,8- 2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0;.хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное.

Продолжение таблицы

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I, С целью повышения выхода биомассы и фермента продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I - Micrococcus luteus ВКПМ В- 2836 культивируют на среде, содержащей следующие компоненты, мас.%: гидролизат казеина 1,8-2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное. Преимущество предлагаемой среды заключается в увеличении выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной питательной среде, при этом выход биомассы достигает 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды, а активность фермента - 100-420 тыс. ед/г, 2 ил., 1 табл. сл

Ю 15 20 25 30 35 40 45 SO 55 WC

Фиг Л

2 Ц

6 в Ю 72 W $ 78 Фиг.2

vac