МЕЧЕННЫЙ ДЕЙТЕРИЕМ Boc-Trp-Pro-Pro-Trp Российский патент 2025 года по МПК C07K5/117 C07B59/00 A61K38/07 A61P25/28 

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях.

При изучении физиологически активных соединений необходимы их меченные изотопами водорода аналоги.

Известно, что замена атомов соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans E.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48).

Исходный пептид Boc-Trp-Pro-Pro-Trp (Шевченко K.B., Андреева Л.А., Нагаев И.Ю., Мясоедов Н.Ф. "Устойчивость Boc-Trp-Pro-Pro-Trp пептидного аналога ПАМ-43" //Тезис на конференцию 6-я российская конференция по медицинской химии Медхим 2024, Россия, Нижний Новгород, 1-4 июля 2024 г., С. 375) прошел тестирование как аналог позитивного аллостерического модулятора ПАМ-43 3,7-бис(2,3-дигидро-1-бензофуран-5-илкарбонил)-1,5-диметил-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан-9-он, который может быть использован для лечения болезни Альцгеймера. Исследования влияния пептида Boc-Trp-Pro-Pro-Trp на специфическое связывание меченного изотопами водорода [³Н]ПАМ-43 показало, что пептид влияет на характер специфического связывания радиолиганда, причем эффект обнаружен как для высокоаффинного сайта связывания ПАМ-43, так и для его низкоаффинного основания предположить существование направленных аллостерических эффектов разработанного пептида в отношении глутаматной рецепторной системы головного мозга млекопитающих, а также открывает перспективы дальнейших исследований биологических эффектов этого пептида, с целью создания в будущем лекарственных средств на его основе (Вьюнова Т.В., Шевченко К.В., Нагаев И.Ю., Мясоедов Н.Ф. "Оценка специфического связывания Boc-Trp-Pro-Pro-Trp и Trp-Pro-Pro-Trp с плазматическими мембранными клетками мозга крыс" //Тезис на конференцию 6-я российская конференция по медицинской химии Медхим 2024, Россия, Нижний Новгород, 1-4 июля 2024 г., С. 327).

Получение дейтерированного аналога Boc-Trp-Pro-Pro-Trp, таким образом, позволит наладить масс-спектрометрический анализ в экспериментах in vivo, что ускорит преодоление необходимых стадий для внедрения этого пептида в практическую медицину как средство, стимулирующие функции мозга, облегчающие обучаемость, улучшающие память.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений.

Достигается указанный технический результат получением меченного дейтерием Boc-Trp-Pro-Pro-Trp.

Ниже приведены примеры реализации изобретения.

Пример I

Раствор 10 мг Boc-Trp-Pro-Pro-Trp в 0.1 мл метанола добавляли к 400 мг 5% PdO/BaSO₄. Метанол удаляли упариванием на роторном испарителе и остаток лиофилизировали. Затем 100 мг смеси помещали в ампулу, которую вакуумировали до давления 0.1 Па, заполняли газообразным дейтерием до давления 400 гПа и выдерживали при температуре 170°С в течение 10 мин. Избыток газообразного дейтерия удаляли вакуумированием. Вещество с катализатора экстрагировали метанолом (5x2 мл) и отделяли фильтрованием. Лабильный дейтерий удаляли несколько раз, растворяя вещество в метаноле (5x2 мл) и упаривая последний. Выход [Т)]пептида - 16%, среднее включение дейтерия 7.6 атома. Анализ проводили на хроматографе Милихром А-02, колонка ProntoSIL-120-5-C18 AQ (2×75 мм, размер частиц 5 мкм), температура колонки 35°С, длина волны 210 нм. Элюент А - Н₂О+0.1% уксусной кислоты, элюент Б - метанол, линейный градиент от 0 до 50% Б за 10 мин. Скорость подачи элюента 0.2 мл/мин. Масс-спектрометрические данные получали на приборе LCQ Advantage MAX (Термоэлектрон, США), с ионизацией электрораспылением, прямым вводом раствора образца с концентрацией 10 мкг/мл в воде с добавлением 0.1% уксусной кислоты и дальнейшей фрагментацией молекулярного пика в анализаторе методом ионных соударений при 35 эВ.

Пример II

При использовании смеси пептид-5% PdO/BaSO₄ (1:40) проводили изотопный обмен с дейтериевой водой. 100 мг смеси помещали в ампулу и обрабатывали газообразным дейтерием (давление 400 гПа) в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем в ампулу добавляли 0.1 мл дейтериевой воды и вытесняли дейтерий аргоном. Ампулу запаивали и грели при 125°С в течение 10 минут. Включение дейтерия составило 8.23 атома на молекулу, выход Boc-Trp-Pro-Pro-Trp составил около 6%.

Пример III

Синтез проводили при использовании D₂ и смеси пептид-5% PdO/BaSO4 (1:40) при температуре 150°С. В реакцию брали 200 мг смеси Boc-Trp-Pro-Pro-Trp и 5% PdO/BaSO₄, давление газообразного дейтерия 400 гПа. Реакцию вели 10 минут при 150°С. Затем вещество смывали с катализатора метанолом (5x1 мл). Выход препарата 25-30%, содержание дейтерия в пределах 4-5 атомов на молекулу.

Таким образом, получено новое, меченное дейтерием соединение (см. фиг.1).

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях. Предложен новый меченный дейтерием Boc-Trp-Pro-Pro-Trp. Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений. 1 ил., 3 пр.

Меченный дейтерием Boc-Trp-Pro-Pro-Trp.