Способ получения диагностикума для выявления антидигоксиновых антител Советский патент 1983 года по МПК G01N33/531 

оо со

4 Изобретение относится к способу получения диагностикума, который может найти применение в медицине и биологии для выявления иммунного .. ответа на дигоксин и рефрактерности застойной недостаточности кровообращения при ишемической болезни сердца в кардиологии. Известные способы получения диагностикумов для выявления антител к лекарственньлм. препаратам, например барбитуратам и фенотиазимам,основатл на ковалентном связывании реакционйо способных производных фармакологических соединений с белковыми компонентами ЭРИТРОЦИТОВ млекопитающих. В этих способах в зависимости от структуры фармакологического препарата в качестве реакционноспособных производных используют хлорформиаты ил диазрниевые - соли и для получения каж дого диагностикума подбирают конкрет ные условия проведения процесса температуру, раствора и соотношение исходных компонентов Cl3 и С2 Для выявления.антидигоксиновых антител в экспериментах на животных применяют метод равновесного диализа в котором сыворотку крови инкубируют с радиоактивным дигоксином в течение 18 ч при 25°С, Затем с помощью жидкостного сцйнтилляцйонного счетчи ка устанавливают концентрацию свобод ного и связанного с антителами дигоксина и. на основании этих данных . рассчитывают концентра.цию антидигоксиновых антител в сыворотке крови 31 Г Недостатке этого способа являетс необходимость использования дорогост ящих реактивов (радиоактивный дигокЬин) и оборудования {сцинтилляционны счетчик). Кроме того, процесс выявления антидигоксиновых антител длителен (25 Известен способ ковалентного связывания дигоксина с белками при помо щи периодатного окисления и последую щего восстановления боргидрадом натрия, при этом взаимодействие дигоксина с человеческим сывороточным аль-т бумином осуществляют рН 9,5 в присутствии большого избытка боргидрида натрия .4 .- ; Однако указ анным способом получить диагностикум для выявления, антидигоксиновых антител не удается, так как невозможно провести аналогичные превращения с белкойыми компонентами мембраны эритроцитов. В этих условиях наблюдаются лизис и агглютинация. эритроцитов (осуществление реакции пассивной гемагглютизации (ПГА), с помощью которой выявляются антидигоксинЬвые антитела, невозможно с использованием полученного производного дигоксана). Предлагаемый способ получения , диагностикума для выявления антидигоксиновых антител заключается в том, что дигоксин окисляют периодатом лития и затем подвергают .взаимодействию с эритроцитами барана(ЭБ) при рН ,4 и соотношении окисленное производное дигоксина: эритроциты (0,5-0,6) (1,8-2,0)-10° . Способ осуществляют следующим образом. Раствор дигоксина в физиологическом растворе обрабатывают избытком периода лития в присутствии небольших количеств органических растворителей - этанола, диоксана и этиленгликоля. Далее раствор добавляют ксуспензии ЭБ, суспендированных в забуференном физиологическом растворе при рН 7,0-7,5 и инкубируют 1 ч при перемешивании и 20-25°С. В реакцию вводят (0,5-0., 6) дигоксина на (1,8-2,0)- 10 эритроцитов. Уменьшение количества вводимого дигоксина приводит к уменьшению чувствительности диагностикума, а увеличение - к лизису и гибели эритроцитов в условиях проведения процесса. Ковалентное связывание дигоксина с ЭБ протекает по схеме

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТЙКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИДЙГОКСИНОВБК АНТИТЕЛ, отличающийся тем, что дигоксин окисляют периодатом лития и затем подвергают взаимодействию с эритроцитами барана при рН 7,,4 и соотношении окисленное производное дигоксина: эритроциты